Acetylcholinesterase Rabbit mAb

目录号：F2495

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生物描述

特异性

Acetylcholinesterase Rabbit mAb 可检测内源性 Acetylcholinesterase (AChE) 总的蛋白水平。
背景

乙酰胆碱酯酶 (AChE) 是一种胆碱能酶，主要存在于肌肉和神经的突触后神经肌肉接头处，在那里它将乙酰胆碱 (ACh) 水解为乙酸和胆碱，从而有效终止突触传递。当神经信号传播并刺激或激活细胞膜时，会释放神经递质乙酰胆碱。因此，ACh 受体会发生构象变化，细胞膜会释放钙离子。这些钙离子通过触发磷脂的额外变化来刺激神经和肌肉纤维。本质上，以 ACh 为起始的信号的下游效应会导致细胞信号的放大和传播。从结构上讲，AChE 以单体 (G1)、二聚体 (G2) 或四聚体 (G4) 的形式存在，四聚体通常通过二硫键与胶原样尾部 (A 型) 相连。这些尾巴可以组装成双（A8）或三（A12）四聚体。AChE 的主要功能是通过在神经传递后快速分解 ACh 来防止胆碱能受体的过度刺激。

使用信息

抗体应用 WB, IHC 稀释比例
WB IHC
1:1000 1:50
反应性 Mouse, Rat
抗体类型 Rabbit MW 68 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IHC
实验步骤：
 
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
 
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
 

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: Mouse brain
    Lane 2: Mouse striatum
    Lane 3: Rat brain
    Lane 4: Rat striatum