ACOX1/AOX Rabbit mAb

目录号：F2438

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生物描述

特异性

ACOX1/AOX Rabbit mAb 可检测内源性 ACOX1/AOX 总的蛋白水平。
背景

酰基辅酶 A 氧化酶 1 (ACOX1) 是过氧化物酶体脂肪酸氧化 (FAO) 中的关键酶，可催化将直链脂肪酰基辅酶 A 转化为 2-反式烯酰基辅酶 A 的初始和限速步骤，同时产生过氧化氢作为副产物。在高脂饮食条件下，其活性会增加，导致过氧化物酶体中的过氧化氢水平升高，从而引起氧化应激并对线粒体脂肪酸代谢产生负面影响。这种过量生产会产生过剩的乙酰辅酶 A，抑制线粒体 FAO 中的限速酶 CPT-1A。过氧化物酶体 FAO 中 NADH 的增加会改变细胞浆 NADH/NAD+ 比率，降低 SIRT1 活性，从而减少线粒体 FAO 和活性氧 (ROS) 代谢。抑制 ACOX1 可增强线粒体 FAO 并减少氧化应激。它对于分解极长链脂肪酸 (VLCFA) 和特定的多不饱和脂肪酸也至关重要，是代谢健康的关键调控因子，也是肥胖相关代谢紊乱的潜在治疗靶点。

使用信息

抗体应用 WB, IP, IF, FCM 稀释比例
WB IP IF FCM
1:1000 1:50 1:200 1:50 - 1:200
反应性 Human, Mouse, Rat
抗体类型 Rabbit MW 74 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB

Western Blotting

 
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 120min)
 
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
 
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
 
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
IF

实验步骤：

 
标本制备
1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。
注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。
2. 室温固定细胞 15 分钟。
3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。
4. 继续进行免疫染色。
 
免疫染色
1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。
2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。
3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。
4. 4°C 孵育过夜。
5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。
7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。
9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。 如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: Rat brain
    Lane 2: Rat heart
    Lane 3: Rat liver