Datasheet

生物描述

特异性	Akt2 Rabbit mAb 用于检测内源性 Akt2 总的蛋白水平。
背景	Akt，也称为 PKB 或 Rac，在调节细胞存活和凋亡中发挥着关键作用。 AKT 存在三种亚型（AKT1、AKT2 和 AKT3），每种亚型具有不同的功能、特征和表达模式，具体取决于细胞类型。 AKT2 与癌症生物学的各个方面尤其相关，包括细胞代谢、增殖、存活、转移、血管生成和耐药性。在多种癌症类型中观察到不同 AKT 同工型的表达升高，这使得它们成为癌症靶向治疗的有希望的靶标。在非小细胞肺癌 (NSCLC) 中，肿瘤组织中 AKT2 表达上调，敲低 AKT2 表达可通过诱导细胞周期停滞来减弱细胞增殖。在乳腺癌中，抑制 AKT2 活性可有效阻止非癌症干细胞 (non-CSC) 转化为上皮细胞，并削弱非 CSC 和 CSC（癌症干细胞）的侵袭和集落形成能力。

特异性

Akt2 Rabbit mAb 用于检测内源性 Akt2 总的蛋白水平。

背景

Akt，也称为 PKB 或 Rac，在调节细胞存活和凋亡中发挥着关键作用。 AKT 存在三种亚型（AKT1、AKT2 和 AKT3），每种亚型具有不同的功能、特征和表达模式，具体取决于细胞类型。 AKT2 与癌症生物学的各个方面尤其相关，包括细胞代谢、增殖、存活、转移、血管生成和耐药性。在多种癌症类型中观察到不同 AKT 同工型的表达升高，这使得它们成为癌症靶向治疗的有希望的靶标。在非小细胞肺癌 (NSCLC) 中，肿瘤组织中 AKT2 表达上调，敲低 AKT2 表达可通过诱导细胞周期停滞来减弱细胞增殖。在乳腺癌中，抑制 AKT2 活性可有效阻止非癌症干细胞 (non-CSC) 转化为上皮细胞，并削弱非 CSC 和 CSC（癌症干细胞）的侵袭和集落形成能力。

使用信息

抗体应用

WB, IP

稀释比例

WB	IP
1: 1000	1:50

反应性

Human, Mouse, Rat, Monkey

抗体类型

Rabbit

MW

60 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	实验步骤：电泳分离 1.根据提取蛋白的浓度,加载适量蛋白样本和marker至SDS-PAGE胶上进行电泳； 2.电源调80V，30分钟。然后电源调（110V~150V），观察Marker，待蛋白所在的预染蛋白Marker指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流不要太大，电流太大（超过150mA）会导致温度上升，影响跑胶结果。如无法避免大电流，可以对电泳槽冰浴来降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化PVDF膜1分钟，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.电源200mA，100分钟。将蛋白电转移至PVDF膜上。（注意电转条件可以按照蛋白大小适当调节，电流大可以节省时间同时对分子量大的蛋白效果好，但需要保持电转槽在低温的环境中，避免胶的融化。推荐不要超过250mA，120分钟。）封闭(可选) 1.电转移后,室温下用TBS洗膜5分钟； 2.在封闭液中孵育膜1小时,室温； 3.用TBST洗膜3次,每次5分钟。抗体孵育 1.用5%的脱脂奶粉来配制一抗工作液（一抗稀释比1: 1000）,4°C条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2.用TBST洗膜3次,每次5分钟； 3.在封闭液中加入二抗,室温条件下与膜轻柔摇晃孵育1小时； 4.孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。显色 1.加入配制好的ECL发光底物(或根据二抗选择其他显色基质)混合均匀； 2.与膜孵育1分钟,去除多余底物(保持膜湿润)，置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

实验步骤：

电泳分离

1.根据提取蛋白的浓度,加载适量蛋白样本和marker至SDS-PAGE胶上进行电泳；

2.电源调80V，30分钟。然后电源调（110V~150V），观察Marker，待蛋白所在的预染蛋白Marker指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流不要太大，电流太大（超过150mA）会导致温度上升，影响跑胶结果。如无法避免大电流，可以对电泳槽冰浴来降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化PVDF膜1分钟，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.电源200mA，100分钟。将蛋白电转移至PVDF膜上。（注意电转条件可以按照蛋白大小适当调节，电流大可以节省时间同时对分子量大的蛋白效果好，但需要保持电转槽在低温的环境中，避免胶的融化。推荐不要超过250mA，120分钟。）

封闭(可选)

1.电转移后,室温下用TBS洗膜5分钟；

2.在封闭液中孵育膜1小时,室温；

3.用TBST洗膜3次,每次5分钟。

抗体孵育

1.用5%的脱脂奶粉来配制一抗工作液（一抗稀释比1: 1000）,4°C条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2.用TBST洗膜3次,每次5分钟；

3.在封闭液中加入二抗,室温条件下与膜轻柔摇晃孵育1小时；

4.孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。

显色

1.加入配制好的ECL发光底物(或根据二抗选择其他显色基质)混合均匀；

2.与膜孵育1分钟,去除多余底物(保持膜湿润)，置于显影仪中进行曝光。

文献参考

[1] Liu T, et al. Respir Res. 2020 Sep 1;21(1):227.

Application Data

WB

Validated by Selleck

Lane 1: Hela
Lane 2: C6
Lane 3: Jurkat
Lane 4: JAR
Lane 5: NIH/3T3
Lane 6: A431