Aldolase + Aldolase B + Aldolase C Rabbit mAb

目录号：F2805

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生物描述

特异性 Aldolase + Aldolase B + Aldolase C Rabbit mAb 可检测内源性 Aldolase + Aldolase B + Aldolase C 总蛋白水平。
背景 醛缩酶 + 醛缩酶 B + 醛缩酶 C 是关键的糖酵解酶，可催化果糖-1,6-二磷酸或果糖-1-磷酸可逆裂解为磷酸二羟丙酮和3-磷酸甘油醛或甘油醛。在脊椎动物中，三种醛缩酶同工酶——醛缩酶 A、B 和 C——具有高度保守的 αβ-桶状折叠和催化机制，但在组织分布和功能作用上有所不同。醛缩酶 A 主要在肌肉和红细胞中表达，支持高糖酵解通量；醛缩酶 B 主要存在于肝脏、肾脏和小肠中，在糖酵解和糖异生中发挥关键作用；醛缩酶 C 在脑和神经组织中富集，其确切的代谢功能尚不明确，但可能与神经发育和能量代谢有关。尽管这三种同工酶的活性位点结构相似且共用催化残基，但它们的同工酶特异性残基 (ISR) 有所不同，这些残基聚集在蛋白质表面，可能介导不同的蛋白质间相互作用或调控特性。这三种醛缩酶还表现出非催化的“兼职”功能，以组织特异性的方式与细胞骨架蛋白、代谢酶和其他大分子相互作用，从而进一步丰富了它们的细胞功能。

使用信息

抗体应用 WB, FCM 稀释比例
WB FCM
1:1000-1:10000 1:20
反应性 Human, Mouse, Rat, Pig
抗体类型 Rabbit MW 39 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB
实验步骤：
 
样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。
2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。
3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。
4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
 
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表
2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
 
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；
4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表
湿转法参考条件：200 mA, 60 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
 
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
 
抗体孵育
1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；
2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
 
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
 

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