目录号：F2199

打印

生物描述

特异性

Alpha Actinin/ACTN1 Rabbit mAb 可检测内源性 α-Actinin 总的蛋白水平。
背景

α-辅肌动蛋白 (α-actinin) 是一种广泛表达的细胞骨架蛋白，属于丝状肌动蛋白 (F-actin) 交联蛋白超家族。它存在于肌肉和非肌肉细胞的各种亚细胞区域，包括细胞与细胞和细胞与基质相互作用的部位、细胞突起和密集的应力纤维。这种广泛的存在使 α-辅肌动蛋白能够在细胞内发挥多种作用，充当细胞骨架和各种跨膜蛋白之间不同类型的连接之间的桥梁。人类 α-辅肌动蛋白有四种已知的同工型：α-辅肌动蛋白-2 和 α-辅肌动蛋白-3，主要与肌肉细胞相关，以及 α-辅肌动蛋白-1 和 α-辅肌动蛋白-4，存在于非肌肉细胞中。这些同工型被认为是维持大规模 F-肌动蛋白组织的关键结构元素，这对于细胞形状和运动至关重要。α-辅肌动蛋白-2 已被与各种肌病有关，包括杆状体肌病、肥厚性心肌病和扩张型心肌病。它还可能在中枢神经系统 (CNS) 疾病中发挥间接作用，例如精神分裂症、癫痫、缺血性脑损伤、中枢神经系统狼疮和神经退行性疾病。“非肌肉”α-辅肌动蛋白在肾脏中起着关键作用，它们是肾小球滤过屏障的组成部分。此外，α-辅肌动蛋白存在于肝实质和导管细胞的膜和细胞质中，它似乎参与了丙型肝炎病毒的复制。此外，α-辅肌动蛋白，特别是 α-辅肌动蛋白-4，与癌症进展和转移以及参与免疫反应的各种细胞类型的迁移有关。

使用信息

抗体应用 WB, IP, IF 稀释比例
WB IP IF
1:1000 1:20 1:100 - 1:200
反应性 Human, Mouse, Rat
抗体类型 Rabbit MW 103 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB
Western Blotting
 
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 120min)
 
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
 
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
 
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
IF

实验步骤：

 
标本制备
1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。
注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。
2. 室温固定细胞 15 分钟。
3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。
4. 继续进行免疫染色。
 
免疫染色
1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。
2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。
3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。
4. 4°C 孵育过夜。
5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。
7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。
9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。 如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: PC-12
    Lane 2: C6
    Lane 3: NIH/3T3