AMPA Receptor 2 (GluA2) Rabbit mAb

目录号：F1223

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生物描述

特异性

AMPA Receptor 2 (GluA2) Rabbit mAb识别内源性的总GluA2蛋白。基于抗原的序列同源性，该抗体不识别其他AMPA受体亚基(如GluA1, GluA3或GluA4)。
背景

AMPA 亚型谷氨酸受体 (AMPAR) 是快速兴奋性突触传递的关键介质，对长期突触可塑性至关重要，包括长期增强 (LTP) 和长期抑制 (LTD)，它们是学习和记忆的模型。在海马 CA1 锥体神经元中，大多数 AMPAR 是 GluA1 和 GluA2 亚基的异源复合物。GluA2 亚基影响 AMPAR 的关键特性，例如 Ca2+ 通透性、单通道电导和受体运输。 GluA2 与 N-钙粘蛋白之间的相互作用对于代谢型谷氨酸受体依赖性 LTD (mGluR-LTD) 至关重要，这是通过依赖肌动蛋白丝切蛋白的肌动蛋白重组实现的。GluA2/N-钙粘蛋白相互作用对肌动蛋白相关过程的调节为 AMPAR 提供了一种机制，可影响中枢突触的长期突触可塑性。

使用信息

抗体应用 WB, IP 稀释比例
WB IP
1:1000 1:50
反应性 Human, Mouse, Rat
抗体类型 Rabbit MW 100 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB
Western Blotting
 
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜(湿转法参考条件: 200mA 120min)。
 
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
 
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
 
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: Mouse brain
    Lane 2: Rat brain
    Lane 3: Human cortex