目录号：F0269

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生物描述

特异性

AMPKα Rabbit mAb 可检测总 AMPKα 蛋白的内源水平。
背景

AMP 激活蛋白激酶 (AMP-activated protein kinase, AMPK) 作为细胞能量水平的传感器，调节 ATP 消耗或再生过程，以维持细胞能量平衡。 AMPK 以异三聚体复合物形式存在，包含一个催化 α 亚基和两个调节亚基 β 和 γ。 催化亚基的两种异构体（AMPKα1 和 AMPKα2）都会因运动和细胞应激等事件触发的 ATP 消耗而被激活，当腺苷酸激酶活性导致 ATP 水平下降时，细胞内 AMP 水平会升高。 ATP 耗尽和苯乙双胍激活 AMPK 需要上游激酶将 AMPK 催化 (α) 亚基的 T 环残基（AMPKα1 中的 Thr172）磷酸化。

使用信息

抗体应用 WB, IP 稀释比例
WB IP
1: 1000 1:50
反应性 Human, Mouse, Rat, Monkey, Bovine
抗体类型 Rabbit  MW 62 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB
实验步骤：
 
电泳分离
1.根据提取蛋白的浓度,加载适量蛋白样本和marker至SDS-PAGE胶上进行电泳；
2.电源调80V，30分钟。然后电源调（110V~150V），观察Marker，待蛋白所在的预染蛋白Marker指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流不要太大，电流太大（超过150mA）会导致温度上升，影响跑胶结果。如无法避免大电流，可以对电泳槽冰浴来降温。）
 
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化PVDF膜1分钟，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；
4.电源200mA，100分钟。将蛋白电转移至PVDF膜上。（注意电转条件可以按照蛋白大小适当调节，电流大可以节省时间同时对分子量大的蛋白效果好，但需要保持电转槽在低温的环境中，避免胶的融化。推荐不要超过250mA，120分钟。）
 
封闭(可选)
1.电转移后,室温下用TBS洗膜5分钟；
2.在封闭液中孵育膜1小时,室温；
3.用TBST洗膜3次,每次5分钟。
 
 抗体孵育
1.用5%的脱脂奶粉来配制一抗工作液（一抗稀释比1: 1000）,4°C条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；
2.用TBST洗膜3次,每次5分钟；
3.在封闭液中加入二抗,室温条件下与膜轻柔摇晃孵育1小时；
4.孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
显色
1.加入配制好的ECL发光底物(或根据二抗选择其他显色基质)混合均匀；
2.与膜孵育1分钟,去除多余底物(保持膜湿润)，置于显影仪中进行曝光。
 

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: HeLa
    Lane 2: K-562
    Lane 3: C6
    Lane 4: Neuro-2a