Anti-Angiotensin II Type 2 Receptor Rabbit Antibody [F9C2] Datasheet

生物描述

特异性	Anti-Angiotensin II Type 2 Receptor Rabbit Antibody [F9C2] 可检测内源性 Angiotensin II Type 2 Receptor 总的蛋白水平。
背景	血管紧张素 II 型 2 型受体 (AT2R) 是 G 蛋白偶联受体 (GPCR) 家族的成员，与刺激性 (Gαs) 或抑制性 (Gαi/o) 蛋白以及涉及 AT2R 结合蛋白的 G 蛋白非依赖性途径相关。其激活会触发酶，例如 SHP-1（含 SH2 结构域的磷酸酶 1）、MKP-1（丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶 1）和 PP2A（蛋白磷酸酶 2A），这些酶在信号通路中发挥重要作用。AT2R 通过减少炎症、改善心室功能、减少疤痕组织以及通过凋亡调控和细胞存活途径防止有害的心脏重塑，对心血管和肾脏保护至关重要。AT2R 的缺失会导致心力衰竭恶化，而适度的过表达会增强受伤后的心脏功能。其激活还与减少纤维化、改善肾小球滤过率 (GFR) 和减轻炎症，对糖尿病肾病等肾脏疾病特别有益。它通过降低 TNF-α 和 IL-6 等细胞因子并增加 IL-10 表现出抗炎作用，有助于调控免疫细胞，促进心脏和肾脏健康。它与 MasR 的相互作用有望用于 SARS-CoV-2 治疗，因为它可能抵消病毒引起的 ACE2 下调，从而恢复有利的 Ang (1–7)/MasR 信号通路。

特异性

Anti-Angiotensin II Type 2 Receptor Rabbit Antibody [F9C2] 可检测内源性 Angiotensin II Type 2 Receptor 总的蛋白水平。

背景

血管紧张素 II 型 2 型受体 (AT2R) 是 G 蛋白偶联受体 (GPCR) 家族的成员，与刺激性 (Gαs) 或抑制性 (Gαi/o) 蛋白以及涉及 AT2R 结合蛋白的 G 蛋白非依赖性途径相关。其激活会触发酶，例如 SHP-1（含 SH2 结构域的磷酸酶 1）、MKP-1（丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶 1）和 PP2A（蛋白磷酸酶 2A），这些酶在信号通路中发挥重要作用。AT2R 通过减少炎症、改善心室功能、减少疤痕组织以及通过凋亡调控和细胞存活途径防止有害的心脏重塑，对心血管和肾脏保护至关重要。AT2R 的缺失会导致心力衰竭恶化，而适度的过表达会增强受伤后的心脏功能。其激活还与减少纤维化、改善肾小球滤过率 (GFR) 和减轻炎症，对糖尿病肾病等肾脏疾病特别有益。它通过降低 TNF-α 和 IL-6 等细胞因子并增加 IL-10 表现出抗炎作用，有助于调控免疫细胞，促进心脏和肾脏健康。它与 MasR 的相互作用有望用于 SARS-CoV-2 治疗，因为它可能抵消病毒引起的 ACE2 下调，从而恢复有利的 Ang (1–7)/MasR 信号通路。

使用信息

抗体应用

WB, IP

稀释比例

WB	IP
1:1000-1:10000	1:20

反应性

Human, Mouse, Rat

抗体类型

Rabbit

MW

41 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN₃

储存条件
(自收到货起)

–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 将细胞转移至EP管中。用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声破碎，冰上静置裂解 30 min。冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 将细胞转移至EP管中。用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声破碎，冰上静置裂解 30 min。冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 120 min。

（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

文献参考

[1] Fatima N, et al. Hypertension. 2021 Jun;77(6):1845-1856.

Application Data

WB

Validated by Selleck

Lane 1: HepG2
Lane 2: Human heart
Lane 3: Mouse heart
Lane 4: Rat heart