Anti-EAAT1 Rabbit Antibody [E21K7]

目录号：F0777

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生物描述

特异性

Anti-EAAT1 Rabbit Antibody [E21K7] 可检测内源性 EAAT1 总的蛋白水平。
背景

谷氨酸是哺乳动物中枢神经系统中的主要兴奋性神经递质，但该系统的长期激活会导致神经损伤和细胞死亡。从突触前神经元和突触传递释放后，谷氨酸通过跨膜谷氨酸转运体被重新吸收到突触前神经元或邻近的神经胶质细胞中。其中，兴奋性氨基酸转运体 (EAAT) 1 和 EAAT2 是 Na+ 依赖性转运体，主要在中枢神经系统的神经胶质细胞中表达。它们通过防止过量的谷氨酸溢出突触间隙，在调控谷氨酸能兴奋性方面发挥着至关重要的作用。这一功能是由它们结合和运输谷氨酸到星形胶质细胞和小胶质细胞的能力促成的。EAAT1 和 EAAT2 的活性在多个层面受到严格调控，包括基因表达、转录后剪接、糖基化和细胞表面运输。虽然EAAT2 在神经传递中更为丰富且研究得更为透彻，而 EAAT1 的具体作用仍不太清楚。然而，已知 EAAT1 表达会随着培养的原代星形胶质细胞培养基中谷氨酸浓度升高而增加，这表明这种谷氨酸转运蛋白可能具有额外的重要意义。值得注意的是，EAAT1 在缺血事件后显示出神经保护潜力，因为反应性星形胶质细胞和活化的小胶质细胞在这种情况下主要表达 EAAT1 而不是 EAAT2。

使用信息

抗体应用 IF 稀释比例
IF
1:100
反应性 Human, Mouse, Rat
抗体类型 Rabbit MW 58 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN₃
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IF
实验步骤：
样品准备
1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。
2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。
3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。
4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。
 
固定
1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
 
封闭
添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）
注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。
 
免疫荧光染色（第一天）
1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。
2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。
 
免疫荧光染色（第二天）
1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。
3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光 孵育 5~10 min。
5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。
 
封片
1. 抗荧光淬灭封片剂封片。
2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。
3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。

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