Anti-Insulin Rabbit Antibody [K13G15]

目录号：F0436

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生物描述

特异性

Anti-Insulin Rabbit Antibody [K13G15] 可检测内源性 Insulin 总蛋白水平。
背景 胰岛素是一种由51个氨基酸组成的肽类激素，由胰腺β细胞分泌。它通过与胰岛素受体（IR）结合，在维持血糖稳态中发挥重要作用。胰岛素受体是一种跨膜受体酪氨酸激酶，由两个负责配体结合的细胞外α亚基和两个介导信号转导的细胞内β亚基组成。胰岛素结合后，受体的酪氨酸残基发生自身磷酸化，从而激活其激酶活性。这导致胰岛素受体底物（IRS）磷酸化，进而募集并激活磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）。活化的PI3K生成磷脂酰肌醇(3,4,5)-三磷酸（PIP3），从而促进AKT（蛋白激酶B）的激活。活化的AKT调节多个下游代谢过程：它通过诱导GLUT4葡萄糖转运蛋白易位至细胞膜来促进骨骼肌和脂肪组织的葡萄糖吸收；通过磷酸化和抑制转录因子FOXO1来抑制肝葡萄糖生成；以及通过抑制糖原合酶激酶3 (GSK3)来增强糖原储存。此外，胰岛素信号通过PDE3B和ABHD15介导的对脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)和激素敏感性脂肪酶(HSL)的抑制来抑制脂肪分解，同时通过激活mTORC1复合物来促进脂肪生成和蛋白质合成。当细胞对胰岛素信号的响应降低时，就会发生胰岛素抵抗，这通常是由于该通路多个水平的损伤造成的。这些损伤可能包括胰岛素受体数量减少、IRS磷酸化缺陷或PI3K/AKT信号中断。促成因素包括慢性炎症、氧化应激以及二酰甘油和神经酰胺等脂质中间体的积累，这些物质会干扰IRS-1和AKT活性。此外，肝脏和骨骼肌等组织中的异位脂质沉积可激活应激相关激酶，包括JNK和PKCθ，导致IRS蛋白的丝氨酸磷酸化，进而抑制胰岛素信号传导。线粒体功能障碍和内质网(ER)应激也会导致糖代谢受损，从而导致持续性高血糖和进行性β细胞功能障碍——这些都是2型糖尿病的标志。

使用信息

抗体应用 IHC, IF, FCM 稀释比例
IHC IF FCM
1:6400 - 1:25600 1:200 - 1:800 1:50 - 1:200
反应性 Human, Mouse, Rat
抗体类型 Rabbit MW 12 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IF
实验步骤：
 
标本制备
1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。
注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。
2. 室温固定细胞 15 分钟。
3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。
4. 继续进行免疫染色。
 
免疫染色
1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。
2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。
3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。
4. 4°C 孵育过夜。
5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。
7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。
9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。 如需长期保存，请将载玻片平放在 23°C 避光保存。
 
IHC
实验步骤：
 
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
 
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
 

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