Anti-Lysophospholipase 1 Rabbit Antibody [F5K18]

目录号：F2816

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生物描述

特异性

Anti-Lysophospholipase 1 Rabbit Antibody [F5K18] 可识别内源性Lysophospholipase 1/LPL-I protein水平。
背景 Lysophospholipase 1 （溶血磷脂酶 1，LPL-I），也称为 LYPLA1，是一种细胞质酶，对脂质代谢至关重要，主要负责水解溶血磷脂（LysoPLs），这些是 Lands 循环中的关键中间体，负责磷脂重塑和脂质信号调节。它采用一个保守的 α/β 水解酶折叠，并拥有一个保守的 Ser-His-Asp 催化三联体，能够高效地从溶血磷脂中切割脂肪酰链。LYPLA1 还作为硫酯酶，去棕榈酰化像 HRAS 这样的棕榈酰化蛋白，从而调节它们的亚细胞定位、膜结合和信号传导。广泛表达的 LYPLA1 通过防止溶血磷脂的毒性积累和保持膜的完整性来帮助维持细胞脂质稳态。它与它的同工酶 LYPLA2 协同作用，调节神经发育过程，如神经元分化，特别是通过调节 MAPK 和其他脂质介导的信号通路。LYPLA1 的失调与炎症、神经退行性疾病和癌症进展有关。其酶活性受到底物可用性和包括棕榈酰化、乙酰化以及可能的磷酸化在内的翻译后修饰的调节。

使用信息

抗体应用 WB 稀释比例
WB
1:5000-1:20000
反应性 Human, Mouse, Rat
抗体类型 Rabbit MW 25 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN₃
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB
实验步骤：
 
样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。
2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。
3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。
4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
 
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表
2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
 
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；
4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表
湿转法参考条件：200 mA, 60 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
 
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
 
抗体孵育
1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:5000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；
2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
 
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
 

Application Data