Anti-Perforin Mouse Antibody [P20D17]

目录号：F2444

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生物描述

特异性

Anti-Perforin Mouse Antibody [P20D17] 可检测内源性 Perforin 总蛋白水平。
背景 穿孔素是一种成孔糖蛋白，主要由细胞毒性淋巴细胞（例如自然杀伤 (NK) 细胞和细胞毒性 T 淋巴细胞 (CTL)）产生。它属于 MACPF（膜攻击复合物/穿孔素）家族，由对其功能至关重要的结构域组成：负责成孔的 MACPF 结构域、介导膜结合的钙依赖性 C2 结构域以及提供结构灵活性的 EGF 样结构域。穿孔素一旦分泌到细胞毒性细胞与靶细胞（病毒感染或恶性）之间形成的免疫突触中，就会寡聚化并插入靶细胞膜，形成直径约为 20 nm 的跨膜孔。这些孔允许促凋亡的颗粒酶进入细胞溶胶，从而引发靶细胞凋亡。R298 等关键残基对于寡聚化和成孔至关重要。穿孔素介导的孔形成对于免疫监视和清除异常细胞至关重要，穿孔素的缺陷或突变会导致严重的免疫缺陷症，例如家族性噬血细胞性淋巴组织细胞增生症 (FHL)。穿孔素还在免疫调节中发挥作用，并与各种疾病中细胞毒功能破坏或失调有关。

使用信息

抗体应用 IHC 稀释比例
IHC
1:100
反应性 Human
抗体类型 Mouse MW 70 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IHC
实验步骤：
 
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
 
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
 

Application Data

IHC

Validated by Selleck

  • Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human tonsils tissue with F2444 at 1:100 dilution.

IHC

Validated by Selleck

  • Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human tonsils tissue with F2444 at 1:100 dilution.