Anti-PRDM16 Rabbit Antibody [P2E21] Datasheet

生物描述

特异性	Anti-PRDM16 Rabbit Antibody [P2E21] 可检测内源性 PRDM16 总蛋白水平。
背景	PRDM16是PRDM家族中一个关键的转录因子和表观遗传调控因子，其特征是保守的PR结构域，该结构域具有组蛋白甲基转移酶活性，并具有能够与DNA结合的锌指结构域。它通过调控前体细胞向棕色脂肪组织（BAT）和米色脂肪细胞而非白色脂肪组织（WAT）的分化，在脂肪细胞谱系形成和产热过程中发挥着核心作用。PRDM16通过诱导米色脂肪细胞的形成来促进白色脂肪的褐变，米色脂肪细胞表现出与经典棕色脂肪相似的产热特征。它通过与PPARγ和PGC-1α等辅因子相互作用，激活产热基因程序，例如线粒体的生物合成和UCP1的表达，从而增强能量消耗和代谢健康。PRDM16在皮下脂肪中高度表达，在那里它驱动棕色脂肪样特性，增加全身能量消耗，并预防肥胖和胰岛素抵抗。它通过抑制白色脂肪基因并激活棕色/米色脂肪程序来发挥作用，从而实现对环境或饮食刺激的适应性产热。PRDM16 的缺失会破坏棕色脂肪组织 (BAT) 和米色脂肪的功能，降低能量消耗，并导致肥胖和代谢紊乱。此外，PRDM16 还能抑制脂肪组织纤维化，并通过调节 β-羟基丁酸 (BHB) 等代谢物来促进胰岛素敏感性。它还通过表观遗传抑制 MyoD 等成肌基因并激活脂肪生成通路来控制棕色脂肪和骨骼肌之间的谱系决定。

特异性

Anti-PRDM16 Rabbit Antibody [P2E21] 可检测内源性 PRDM16 总蛋白水平。

背景

PRDM16是PRDM家族中一个关键的转录因子和表观遗传调控因子，其特征是保守的PR结构域，该结构域具有组蛋白甲基转移酶活性，并具有能够与DNA结合的锌指结构域。它通过调控前体细胞向棕色脂肪组织（BAT）和米色脂肪细胞而非白色脂肪组织（WAT）的分化，在脂肪细胞谱系形成和产热过程中发挥着核心作用。PRDM16通过诱导米色脂肪细胞的形成来促进白色脂肪的褐变，米色脂肪细胞表现出与经典棕色脂肪相似的产热特征。它通过与PPARγ和PGC-1α等辅因子相互作用，激活产热基因程序，例如线粒体的生物合成和UCP1的表达，从而增强能量消耗和代谢健康。PRDM16在皮下脂肪中高度表达，在那里它驱动棕色脂肪样特性，增加全身能量消耗，并预防肥胖和胰岛素抵抗。它通过抑制白色脂肪基因并激活棕色/米色脂肪程序来发挥作用，从而实现对环境或饮食刺激的适应性产热。PRDM16 的缺失会破坏棕色脂肪组织 (BAT) 和米色脂肪的功能，降低能量消耗，并导致肥胖和代谢紊乱。此外，PRDM16 还能抑制脂肪组织纤维化，并通过调节 β-羟基丁酸 (BHB) 等代谢物来促进胰岛素敏感性。它还通过表观遗传抑制 MyoD 等成肌基因并激活脂肪生成通路来控制棕色脂肪和骨骼肌之间的谱系决定。

使用信息

抗体应用

WB

稀释比例

WB

1:1000

反应性

Human, Mouse

抗体类型

Rabbit

MW

140 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 120 min。

（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

Anti-PRDM16 Rabbit Antibody [P2E21]

生物描述

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文献参考

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