Anti-RANK Mouse Antibody [E4N12]

目录号：F2425

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生物描述

特异性

Anti-RANK Mouse Antibody [E4N12] 可检测内源性 RANK 总蛋白水平。
背景 RANK（核因子 κB 受体激活剂）是一种由 616 个氨基酸组成的 I 型跨膜糖蛋白，包含 28 个氨基酸的信号肽、184 个氨基酸的胞外结构域、21 个氨基酸的跨膜区和 383 个氨基酸的胞内结构域，含有三个功能性胞质基序——PFQEP(369–373)、PVQEET(559–564) 和 PVQEQG(604–609)——可介导与 TRAF6 等衔接蛋白的相互作用，从而激活 NF-κB、MAPK（JNK、ERK、p38）和 Akt/PKB 通路。 RANK由TNFRSF11A基因编码，在破骨细胞前体、树突状细胞、单核细胞、巨噬细胞、活化T细胞、自然杀伤细胞、胸腺髓质上皮细胞、乳腺上皮细胞和某些上皮干细胞群中表达。功能上，RANK调节破骨细胞在骨重塑中的分化、活化和存活；支持淋巴结器官发生、胸腺上皮发育和免疫耐受；维持上皮干细胞稳态；介导孕酮驱动的乳腺上皮增殖；并且，当其失调时，会促进肿瘤发生、转移和癌症干细胞扩增。

使用信息

抗体应用 IP, IHC 稀释比例
IP IHC
1:500-1:1000 1:200
反应性 Human, Mouse
抗体类型 Mouse MW
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IHC
实验步骤：
 
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
 
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
 

Application Data

IHC

Validated by Selleck

  • Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human gastric cancer tissue with F2425 at 1:50 dilution.

IHC

Validated by Selleck

  • Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human gastric cancer tissue with F2425 at 1:50 dilution.