Anti-SEP15 Rabbit Antibody [A2N16]

目录号：F3600

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生物描述

特异性

Anti-SEP15 Rabbit Antibody [A2N16] 可检测内源性 SEP15 总蛋白水平。
背景

Sep15（15 kDa 硒蛋白）是一种定位于内质网 (ER) 的蛋白质，具有硫氧还蛋白样特性，参与糖蛋白的质量控制。它通过与 UDP-葡萄糖：糖蛋白葡萄糖基转移酶（糖蛋白折叠的关键酶）相互作用发挥作用。尽管 Sep15 的确切生物学作用尚不清楚，但已知其表达受膳食硒和未折叠蛋白反应的影响。在适应性内质网应激条件下，Sep15 会上调，表明其在细胞应激反应中发挥作用。人类 Sep15 基因位于 1p31 染色体上——该基因组区域在各种癌症中经常发生缺失或突变。此外，Sep15 基因中的两个多态性位点影响其表达对硒摄入的反应。值得注意的是，在几种癌症类型中，Sep15 的表达降低。与非癌性肿瘤相比，前列腺癌细胞系、肝细胞癌组织以及恶性肺癌、乳腺癌、前列腺癌和肝癌中的 Sep15 水平较低。这些发现表明，Sep15 可能通过调节与癌症进展相关的糖蛋白的折叠和/或分泌，发挥肿瘤抑制因子的作用。

使用信息

抗体应用 WB 稀释比例
WB
1:1000 - 1:10000
反应性 Rat, Human
抗体类型 Rabbit MW 18 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB
实验步骤：
 
样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。
2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。
3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。
4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
 
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表
2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
 
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；
4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.22 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表
湿转法参考条件：200 mA, 60 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
 
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
 
抗体孵育
1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；
2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
 
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
 

Application Data