APC8 Rabbit mAb Datasheet

生物描述

特异性	APC8 Rabbit mAb 可检测内源性 APC8 总的蛋白水平。
背景	真核细胞增殖严重依赖于后期促进复合物/环化体 (APC/C) 的 E3 泛素连接酶活性，这对于细胞周期从中期过渡到后期至关重要。APC/C 复合物通过将多泛素链添加到底物蛋白上来发挥作用，标记它们以供 26S 蛋白酶体降解。后期促进复合物亚基 8 (APC8，也称为 CDC23) 是 APC/C 内四肽重复 (TPR) 亚复合物的关键组成部分，其中还包括 APC3 (CDC27) 和 APC6 (CDC16)。APC8 与 APC3 和 APC6 相互作用，协助募集 APC/C 共激活亚基 CDC20 和 Cdh1/FZR1。研究表明，APC8 在乳头状甲状腺癌中过表达，在细胞周期进展和细胞生长调控中发挥了重要作用。

特异性

APC8 Rabbit mAb 可检测内源性 APC8 总的蛋白水平。

背景

真核细胞增殖严重依赖于后期促进复合物/环化体 (APC/C) 的 E3 泛素连接酶活性，这对于细胞周期从中期过渡到后期至关重要。APC/C 复合物通过将多泛素链添加到底物蛋白上来发挥作用，标记它们以供 26S 蛋白酶体降解。后期促进复合物亚基 8 (APC8，也称为 CDC23) 是 APC/C 内四肽重复 (TPR) 亚复合物的关键组成部分，其中还包括 APC3 (CDC27) 和 APC6 (CDC16)。APC8 与 APC3 和 APC6 相互作用，协助募集 APC/C 共激活亚基 CDC20 和 Cdh1/FZR1。研究表明，APC8 在乳头状甲状腺癌中过表达，在细胞周期进展和细胞生长调控中发挥了重要作用。

使用信息

抗体应用

WB, IP

稀释比例

WB	IP
1:1000	1:100

反应性

Human, Monkey

抗体类型

Rabbit

MW

64 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	Western Blotting 样品制备 1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。 2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。 3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。 4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。 5. 离心5分钟(使用微量离心机)。 6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。 7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 120min) 膜封闭与抗体孵育 a. 封闭 1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。 2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。 3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 b. 抗体孵育 1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。 2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。 4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 5. 进行检测。显影检测 1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。 2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。 3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

Western Blotting

样品制备

1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。

2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。

3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。

4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。

5. 离心5分钟(使用微量离心机)。

6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。

7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 120min)

膜封闭与抗体孵育

a. 封闭

1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。

2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。

3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

b. 抗体孵育

1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。

2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。

4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

5. 进行检测。

显影检测

1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。

2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。

3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

文献参考

Application Data

WB

Validated by Selleck

Lane 1: SNB75
Lane 2: MOLT-4
Lane 3: COS-7
Lane 4: A498