Atg4B Rabbit mAb

目录号：F1446

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生物描述

特异性

Atg4B Rabbit mAb识别内源性总Atg4B蛋白。
背景

自噬相关蛋白4B（ATG4B） 是自噬相关蛋白ATG4家族的成员，ATG4是一种半胱氨酸蛋白酶，通过介导自噬体形成过程中 ATG8 蛋白的加工和解偶联，在调控自噬中起着至关重要的作用。在非活性状态下，ATG4B 通过结构域隐藏其催化位点，结构域在与 ATG8 结合后会发生构象变化，从而暴露活性位点并使底物裂解。该酶是 ATG8 与磷脂酰乙醇胺 (PE) 脂化所必需的，这是自噬体生物合成的关键步骤。在病毒入侵时，ATG4B通过促进 TANK 结合激酶 1（TBK1 ）的自噬降解，作为免疫反应负调节剂起抗病毒作用。ATG4B 充当促进 TBK1 和 GABA A 型受体相关蛋白)（GABARAP ）之间相互作用的接头。这种相互作用由TBK1的ULD结构域中的LC3相互作用区(LIR)基序所介导，该基序介导TBK1- gabarap复合物的自噬降解。ATG4B过表达与结直肠癌中mTOR信号异常相关，并影响白血病和前列腺癌的肿瘤增殖和化疗耐药。在肿瘤治疗方面，它作为自噬调控靶点而具有潜在应用价值。

使用信息

抗体应用 WB, IP 稀释比例
WB IP
1:1000 1:100
反应性 Human, Mouse, Rat
抗体类型 Rabbit MW 48 Kda
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB

Western Blotting

 
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜 (湿转法参考条件: 150mA 120min)。
 
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
 
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
 
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Application Data

WB

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  • Lane 1: Jurkat
    Lane 2: HEPG2