CDK2 (phospho Thr 14) Rabbit mAb

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生物描述

特异性

CDK2 (phospho Thr 14) Rabbit mAb 可检测当 Thr 14 位点磷酸化时内源性 CDK2 (phospho Thr 14) 总的蛋白水平。
背景

CDK2 是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，属于细胞周期依赖性激酶 (CDK) 家族，由 CDK2 基因编码，通过与细胞周期蛋白 A 和 E 相互作用来调控细胞周期。从结构上讲，它具有双叶结构，N 端 β 片层叶用于细胞周期蛋白结合，C 端 α 螺旋叶含有调控片段。CDK2 与细胞周期蛋白 E 结合，磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白 (Rb) 以启动 G1/S 转换，并与细胞周期蛋白 A 共同促进 S 期进展。CDK2 活性受磷酸化调控：WEE1 激酶通过磷酸化苏氨酸 14 (T14) 和酪氨酸 15 (Y15) 来抑制它，而苏氨酸 160 (T160) 的磷酸化则激活它。 DK2 蛋白及其激酶活性对生殖细胞发育至关重要。异常的 CDK2 活性会导致细胞周期失调和不受控制的增殖。

使用信息

抗体应用 WB, IHC 稀释比例
WB IHC
1:1000 1:1000
反应性 Human , Mouse, Rat, Chicken
抗体类型 Rabbit MW 34 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IHC
实验步骤：
 
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
 
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
 

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: HeLa
    Lane 2: HeLa (hydroxyurea, 3 mM, 24 h)
    Lane 3: HeLa (hydroxyurea, 3 mM, 24 h; Alkaline Phosphatase treated)