CHD4 Rabbit mAb

目录号：F1472

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生物描述

特异性

CHD4 Rabbit mAb 可检测内源性总 CHD4 的蛋白水平。
背景

Chromodomain-解旋酶-DNA 结合 (CHD) 蛋白是一个由九种蛋白质组成的家族，存在于各种生物体中，分为三个亚家族：亚家族 I（CHD1 和 CHD2）、亚家族 II（CHD3 和 CHD4）和亚家族 III（CHD5、CHD6、CHD7、CHD8 和 CHD9）。 CHD 蛋白通常存在于大型多蛋白复合物中，它们在转录激活或抑制中的作用受到其他相关蛋白的影响。所有 CHD 蛋白都具有共同的结构，在氨基末端具有两个串联的染色质结构域、一个 SWI/SNF 相关的 ATPase 结构域和一个羧基末端 DNA 结合结构域。染色质结构域使 CHD 蛋白能够与组蛋白上的甲基化赖氨酸残基结合，促进与特定染色质区域的相互作用，而 ATPase 结构域则利用 ATP 水解产生的能量来重塑染色质结构。CHD3 (Mi2-α) 和 CHD4 (Mi2-β) 是核小体重塑和组蛋白去乙酰化酶 (NuRD) 复合物的关键成分，该复合物还包括 HDAC1、HDAC2、RBAP48、RBAP46、MTA1、MTA2、MTA3 和 MBD3，起转录抑制的作用。

使用信息

抗体应用 WB, IF, ChIP 稀释比例
WB IF CHIP
1:1000 1:400 1:50
反应性 Human, Mouse, Rat, Monkey
抗体类型 Rabbit MW 260 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB
Western Blotting
 
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。
 
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
 
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
 
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
IF
实验步骤：
 
标本制备
1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。
注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。
2. 室温固定细胞 15 分钟。
3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。
4. 继续进行免疫染色。
 
免疫染色
1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。
2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。
3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。
4. 4°C 孵育过夜。
5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。
7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。
9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。 如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。
 

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: NCCIT
    Lane 2: F9
    Lane 3: C6
    Lane 4: COS-7