Datasheet

生物描述

特异性	Cleaved Notch1 (Val1744) Rabbit mAb 用于检测内源性 Cleaved Notch1 (Val1744) 总的蛋白水平。
背景	Notch 蛋白是形成异二聚体蛋白的跨膜受体，包含一个大的胞外配体结合域、一个单程跨膜域和一个称为 Notch 胞内域 (NICD) 的较小胞质亚基。当与 Delta-Serrate-Lag2 (DSL) 家族的配体相互作用时，异二聚体会发生解离，然后进行蛋白水解并释放 NICD。然后 NICD 移动到细胞核，在那里启动目标基因的转录。在小鼠 Notch1 中，NICD 激活是通过 Gly1743 和 Val1744（对应于人 Notch1 中的 Gly1753 和 Val1754）之间的裂解发生的。 Notch1 参与调节细胞分化、细胞命运决定和侧向抑制的细胞内信号传导通路。该基因的突变与多种健康状况有关，包括血癌、异常心血管钙化、主动脉瓣疾病和人类 T 细胞急性淋巴细胞白血病。

特异性

Cleaved Notch1 (Val1744) Rabbit mAb 用于检测内源性 Cleaved Notch1 (Val1744) 总的蛋白水平。

背景

Notch 蛋白是形成异二聚体蛋白的跨膜受体，包含一个大的胞外配体结合域、一个单程跨膜域和一个称为 Notch 胞内域 (NICD) 的较小胞质亚基。当与 Delta-Serrate-Lag2 (DSL) 家族的配体相互作用时，异二聚体会发生解离，然后进行蛋白水解并释放 NICD。然后 NICD 移动到细胞核，在那里启动目标基因的转录。在小鼠 Notch1 中，NICD 激活是通过 Gly1743 和 Val1744（对应于人 Notch1 中的 Gly1753 和 Val1754）之间的裂解发生的。 Notch1 参与调节细胞分化、细胞命运决定和侧向抑制的细胞内信号传导通路。该基因的突变与多种健康状况有关，包括血癌、异常心血管钙化、主动脉瓣疾病和人类 T 细胞急性淋巴细胞白血病。

使用信息

抗体应用

WB, IP, ChIP

稀释比例

WB	IP	CHIP
1: 1000	1:200	1:200

反应性

Human, Mouse, Rat

抗体类型

Rabbit

MW

110 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	实验步骤：电泳分离 1.根据提取蛋白的浓度,加载适量蛋白样本和marker至SDS-PAGE胶上进行电泳； 2.电源调80V，30分钟。然后电源调（110V~150V），观察Marker，待蛋白所在的预染蛋白Marker指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流不要太大，电流太大（超过150mA）会导致温度上升，影响跑胶结果。如无法避免大电流，可以对电泳槽冰浴来降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化PVDF膜1分钟，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.电源200mA，100分钟。将蛋白电转移至PVDF膜上。（注意电转条件可以按照蛋白大小适当调节，电流大可以节省时间同时对分子量大的蛋白效果好，但需要保持电转槽在低温的环境中，避免胶的融化。推荐不要超过250mA，120分钟。）封闭(可选) 1.电转移后,室温下用TBS洗膜5分钟； 2.在封闭液中孵育膜1小时,室温； 3.用TBST洗膜3次,每次5分钟。抗体孵育 1.用5%的脱脂奶粉来配制一抗工作液（一抗稀释比1: 1000）,4°C条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2.用TBST洗膜3次,每次5分钟； 3.在封闭液中加入二抗,室温条件下与膜轻柔摇晃孵育1小时； 4.孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。显色 1.加入配制好的ECL发光底物(或根据二抗选择其他显色基质)混合均匀； 2.与膜孵育1分钟,去除多余底物(保持膜湿润)，置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

实验步骤：

电泳分离

1.根据提取蛋白的浓度,加载适量蛋白样本和marker至SDS-PAGE胶上进行电泳；

2.电源调80V，30分钟。然后电源调（110V~150V），观察Marker，待蛋白所在的预染蛋白Marker指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流不要太大，电流太大（超过150mA）会导致温度上升，影响跑胶结果。如无法避免大电流，可以对电泳槽冰浴来降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化PVDF膜1分钟，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.电源200mA，100分钟。将蛋白电转移至PVDF膜上。（注意电转条件可以按照蛋白大小适当调节，电流大可以节省时间同时对分子量大的蛋白效果好，但需要保持电转槽在低温的环境中，避免胶的融化。推荐不要超过250mA，120分钟。）

封闭(可选)

1.电转移后,室温下用TBS洗膜5分钟；

2.在封闭液中孵育膜1小时,室温；

3.用TBST洗膜3次,每次5分钟。

抗体孵育

1.用5%的脱脂奶粉来配制一抗工作液（一抗稀释比1: 1000）,4°C条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2.用TBST洗膜3次,每次5分钟；

3.在封闭液中加入二抗,室温条件下与膜轻柔摇晃孵育1小时；

4.孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。

显色

1.加入配制好的ECL发光底物(或根据二抗选择其他显色基质)混合均匀；

2.与膜孵育1分钟,去除多余底物(保持膜湿润)，置于显影仪中进行曝光。

文献参考

Application Data

WB

Validated by Selleck

Lane 1: Molt4
Lane 2: Jurkat
Lane 3: MCF7