DLL4 Antibody (Hamster mAb) [N12K10]

目录号：F5840

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生物描述

特异性 DLL4 Antibody (Hamster mAb) [N12K10] 可检测内源性 DLL4 总蛋白水平。
背景 Delta样蛋白4 (DLL4) 是一种内皮细胞富集的Notch配体，属于Delta/Serrate/Lag家族。它具有胞外DSL基序和串联的EGF样重复序列，可与相邻细胞上的Notch受体结合。配体诱导的受体裂解产生Notch胞内结构域，进而驱动转录程序，最终塑造血管模式。DLL4的表达主要局限于动脉和活跃萌芽的内皮细胞，在血管生成血管的顶端细胞和柄细胞中表达水平最高。促血管生成因子，如VEGF和缺氧调节的HIF-1α，能够强烈诱导DLL4的表达。这表明在血管生成调控的层级中，DLL4/Notch信号通路位于VEGF受体激活的下游。在萌芽前沿，新生的顶端细胞上表达的 DLL4 激活邻近茎细胞中的 Notch，下调 VEGF 受体表达，限制顶端细胞过度形成，并强制形成层级分支模式，从而产生功能性、灌注良好的血管网络；DLL4/Notch 信号的基因或药理学阻断会破坏这种侧向抑制，增加内皮细胞增殖和分支，并产生致密但灌注不良、无功能的血管系统。 DLL4在多种实体瘤的血管系统中表达上调，包括结直肠癌、乳腺癌、肾癌、胰腺癌和胶质母细胞瘤模型。在肿瘤或间质中强制表达DLL4可降低血管密度，但会增大管腔并改善血管功能，从而降低缺氧和细胞凋亡，促进肿瘤生长。而可溶性DLL4诱饵或抗DLL4抗体则会增加血管数量，但会损害灌注并抑制肿瘤扩张，即使在对VEGF抑制剂耐药的情况下也是如此。在临床前模型中，肿瘤内皮细胞中高水平的DLL4与更成熟的血管系统和更短的患者生存期相关，而DLL4阻断则持续导致肿瘤血管过度增生和功能性塌陷。这表明DLL4/Notch是血管生成输出的关键负调控因子，它调节并参与VEGF信号通路，而非简单地与其相互作用。

使用信息

抗体应用 IHC, FCM 稀释比例
反应性 Mouse
抗体类型 Hamster Monoclonal Antibody MW 75 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IHC
实验步骤：
 
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
 
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
 

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