DYRK1B Rabbit mAb Datasheet

生物描述

特异性	DYRK1B Rabbit mAb 可检测内源性总 DYRK1B 的蛋白水平。
背景	双特异性酪氨酸 (Y)-磷酸化调控激酶 1B（Dual-Specificity Tyrosine(Y)-Phosphorylation-Regulated Kinase 1B, DYRK1B）属于 DYRK 蛋白激酶家族，该家族通过其催化域活化环内保守酪氨酸残基的共翻译自磷酸化实现完全催化活性。DYRK1B 在某些癌症中经常过度表达，已知在调控细胞分化和细胞周期进程中发挥作用。DYRK 家族包含七种哺乳动物亚型：DYRK1A、DYRK1B、DYRK1C、DYRK2、DYRK3、DYRK4 和 DYRK4B，每种亚型的底物特异性、表达模式和亚细胞定位都不同。所有 DYRK 蛋白在其催化域的活化环中都共享一个 Tyr-X-Tyr 基序，第二个酪氨酸残基的磷酸化对其激酶活性至关重要。DYRK 激酶自磷酸化酪氨酸残基在其活化环内，但主要在丝氨酸和苏氨酸残基上磷酸化其底物。

特异性

DYRK1B Rabbit mAb 可检测内源性总 DYRK1B 的蛋白水平。

背景

双特异性酪氨酸 (Y)-磷酸化调控激酶 1B（Dual-Specificity Tyrosine(Y)-Phosphorylation-Regulated Kinase 1B, DYRK1B）属于 DYRK 蛋白激酶家族，该家族通过其催化域活化环内保守酪氨酸残基的共翻译自磷酸化实现完全催化活性。DYRK1B 在某些癌症中经常过度表达，已知在调控细胞分化和细胞周期进程中发挥作用。DYRK 家族包含七种哺乳动物亚型：DYRK1A、DYRK1B、DYRK1C、DYRK2、DYRK3、DYRK4 和 DYRK4B，每种亚型的底物特异性、表达模式和亚细胞定位都不同。所有 DYRK 蛋白在其催化域的活化环中都共享一个 Tyr-X-Tyr 基序，第二个酪氨酸残基的磷酸化对其激酶活性至关重要。DYRK 激酶自磷酸化酪氨酸残基在其活化环内，但主要在丝氨酸和苏氨酸残基上磷酸化其底物。

使用信息

抗体应用

WB, IP

稀释比例

WB	IP
1:1000	1:100

反应性

Human, Mouse, Rat

抗体类型

Rabbit

MW

70-80 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	Western Blotting 样品制备 1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。 2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。 3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。 4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。 5. 离心5分钟(使用微量离心机)。 6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。 7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 120min) 膜封闭与抗体孵育 a. 封闭 1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。 2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。 3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 b. 抗体孵育 1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。 2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。 4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 5. 进行检测。显影检测 1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。 2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。 3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

Western Blotting

样品制备

1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。

2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。

3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。

4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。

5. 离心5分钟(使用微量离心机)。

6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。

7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 120min)

膜封闭与抗体孵育

a. 封闭

1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。

2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。

3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

b. 抗体孵育

1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。

2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。

4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

5. 进行检测。

显影检测

1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。

2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。

3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

文献参考

[1] Jhaisha SA, et al. Sci Rep. 2017 Jul 25;7(1):6420.

Application Data

WB

Validated by Selleck

Lane 1: PANC-1
Lane 2: A549
Lane 3: Mouse testicle
Lane 4: Rat testicle