eIF3H Rabbit mAb

目录号：F1420

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生物描述

特异性

eIF3H Rabbit mAb检测内源性总eIF3H蛋白水平。
背景

EIF3H 是一种关键的翻译起始因子，也是 JAMM 家族去泛素化酶的成员，与 EIF3F 共享非保守的 MPN 结构域。在多种癌症（包括乳腺癌）中都证实了 EIF3H 的高表达。EIF3H 通过去泛素化和稳定 YAP 来调节 Hippo-YAP 通路，促进肿瘤侵袭和转移。它与 YAP1 的 N 端区域相互作用，促进 YAP1 去泛素化。抑制 EIF3H 介导的 YAP 去泛素化可阻止乳腺癌模型中的肿瘤进展和转移。EIF3H 是真核翻译起始因子 3 (eIF-3) 复合物的一部分，该复合物包括 13 个亚基，在蛋白质合成起始的多个步骤中发挥作用。

使用信息

抗体应用 "WB, IP, IHC, IF " 稀释比例
WB IP IHC IF
1:1000 1:50 1:1600 1:400
反应性 Human, Mouse, Rat, Monkey
抗体类型 Rabbit MW 40 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB

Western Blotting

 
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜(湿转法参考条件: 150mA 90min)。
 
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
 
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
 
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: Hela
    Lane 2: 293
    Lane 3: K562
    Lane 4: RD
    Lane 5: RAW
    Lane 6: Hepa1
    Lane 7: PC12

IHC

Validated by Selleck

  • Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human Colorectal cancer tissue with F1420 at 1/100 dilution.