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生物描述

特异性

FoxO3a Rabbit mAb 用于检测内源性 FoxO3a 总的蛋白水平。
背景

FOXO3a 是叉头转录因子 FOXO 亚家族的成员，在介导各种细胞过程中发挥着关键作用，包括细胞凋亡、增殖、细胞周期进程、DNA 损伤反应和肿瘤发生。 它还对细胞应激（例如紫外线照射和氧化应激）做出反应。 FOXO3a 的功能受到复杂的过程网络的调节，包括 microRNA (miRNA) 的转录后抑制、翻译后修饰 (PTM) 和蛋白质-蛋白质相互作用。 FOXO3a 与多种疾病有关，特别是乳腺癌、肝癌、结肠癌、前列腺癌、膀胱癌和鼻咽癌。 作为肿瘤抑制因子，FOXO3a 在癌细胞系中经常通过 FOXO3a 基因突变或 FOXO3a 蛋白的细胞质隔离而失活。 这种失活与癌症的发生和进展密切相关。 FOXO3a 的过度表达会抑制癌细胞的增殖、致瘤潜力和侵袭性，而 FOXO3a 的沉默会导致对肿瘤发生的保护作用显着降低。

使用信息

抗体应用 WB, IP, IF 稀释比例
WB IP IF
1: 1000 1:100 1:200
反应性 Human, Mouse, Rat, Monkey
抗体类型 Rabbit MW 82 to 97 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB
实验步骤：
 
电泳分离
1.根据提取蛋白的浓度,加载适量蛋白样本和marker至SDS-PAGE胶上进行电泳；
2.电源调80V，30分钟。然后电源调（110V~150V），观察Marker，待蛋白所在的预染蛋白Marker指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流不要太大，电流太大（超过150mA）会导致温度上升，影响跑胶结果。如无法避免大电流，可以对电泳槽冰浴来降温。）
 
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化PVDF膜1分钟，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；
4.电源200mA，100分钟。将蛋白电转移至PVDF膜上。（注意电转条件可以按照蛋白大小适当调节，电流大可以节省时间同时对分子量大的蛋白效果好，但需要保持电转槽在低温的环境中，避免胶的融化。推荐不要超过250mA，120分钟。）
 
封闭(可选)
1.电转移后,室温下用TBS洗膜5分钟；
2.在封闭液中孵育膜1小时,室温；
3.用TBST洗膜3次,每次5分钟。
 
 抗体孵育
1.用5%的脱脂奶粉来配制一抗工作液（一抗稀释比1: 1000）,4°C条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；
2.用TBST洗膜3次,每次5分钟；
3.在封闭液中加入二抗,室温条件下与膜轻柔摇晃孵育1小时；
4.孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
显色
1.加入配制好的ECL发光底物(或根据二抗选择其他显色基质)混合均匀；
2.与膜孵育1分钟,去除多余底物(保持膜湿润)，置于显影仪中进行曝光。
 
IF
实验步骤：
 
标本制备
1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。
注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。
2. 室温固定细胞 15 分钟。
3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。
4. 继续进行免疫染色。
 
免疫染色
1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。
2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。
3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。
4. 4°C 孵育过夜。
5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。
7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。
9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。 如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。
 

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: Jurkat
    Lane 2: PC-3
    Lane 3: Mouse brain
    Lane 4: Mouse brain(KO FoxO3a)