目录号：F0282

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生物描述

特异性

GSK-3α/β Rabbit mAb 用于检测内源性 GSK-3α/β 总的蛋白水平。
背景

糖原合酶激酶-3 (Glycogen synthase kinase-3, GSK-3) 是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，在调节各种细胞功能（包括代谢、转录、翻译、细胞生长和凋亡）中发挥着至关重要的作用。 GSK-3 存在两种相似的异构体，称为 GSK-3α 和 GSK-3β。 这些亚型具有几乎相同的中央激酶结构域，但其末端有很大不同。 GSK-3α 的大小为 52 kDa，其结构比 GSK-3β 大 5 kDa，这归因于氨基末端富含甘氨酸的延伸，其功能仍未知。 GSK-3α 参与调节淀粉样蛋白 β 肽的产生，β 淀粉样蛋白肽是与阿尔茨海默病进展相关的斑块的重要组成部分。 另一方面，GSK-3β 作为心脏肥大的内在抑制剂。 此外，GSK-3β 通过增强线粒体通透性转变来促进心脏损伤。GSK-3 是一种广泛表达的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，可磷酸化糖原合酶并使其失活。 它也是 PI3K/Akt 细胞存活途径的关键下游元件，其活性受到 Akt 介导的 GSK-3α Ser21 和 GSK-3β Ser9 磷酸化的抑制。

使用信息

抗体应用 WB, IP 稀释比例
WB IP
1: 1000 1:50
反应性 Human, Mouse, Rat, Hamster, Monkey
抗体类型 Rabbit MW 51 kDa, 46 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB
实验步骤：
 
电泳分离
1.根据提取蛋白的浓度,加载适量蛋白样本和marker至SDS-PAGE胶上进行电泳；
2.电源调80V，30分钟。然后电源调（110V~150V），观察Marker，待蛋白所在的预染蛋白Marker指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流不要太大，电流太大（超过150mA）会导致温度上升，影响跑胶结果。如无法避免大电流，可以对电泳槽冰浴来降温。）
 
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化PVDF膜1分钟，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；
4.电源200mA，100分钟。将蛋白电转移至PVDF膜上。（注意电转条件可以按照蛋白大小适当调节，电流大可以节省时间同时对分子量大的蛋白效果好，但需要保持电转槽在低温的环境中，避免胶的融化。推荐不要超过250mA，120分钟。）
 
封闭(可选)
1.电转移后,室温下用TBS洗膜5分钟；
2.在封闭液中孵育膜1小时,室温；
3.用TBST洗膜3次,每次5分钟。
 
 抗体孵育
1.用5%的脱脂奶粉来配制一抗工作液（一抗稀释比1: 1000）,4°C条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；
2.用TBST洗膜3次,每次5分钟；
3.在封闭液中加入二抗,室温条件下与膜轻柔摇晃孵育1小时；
4.孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
显色
1.加入配制好的ECL发光底物(或根据二抗选择其他显色基质)混合均匀；
2.与膜孵育1分钟,去除多余底物(保持膜湿润)，置于显影仪中进行曝光。
 

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: NIH3T3
    Lane 2: C6
    Lane 3: CHO
    Lane 4: COS7
    Lane 5: Hela
    Lane 6: HeLa (GSK-3α/β siRNA)
    Lane 7: MEF (GSK-3β (-/-))
    Lane 8: MEF (GSK-3β (-/-);insulin treated)
    Lane 9: MEF (GSK-3α (-/-))
    Lane 10: MEF (GSK-3α (-/-);insulin treated)
    Lane 11: MEF (WT)
    Lane 12: MEF (WT; insulin treated)