HDAC4 Rabbit mAb Datasheet

生物描述

特异性	HDAC4 Rabbit mAb识别内源性HDAC4总蛋白水平。
背景	组蛋白乙酰化和去乙酰化对于调节基因转录至关重要。组蛋白乙酰化由组蛋白乙酰转移酶 (HAT) 介导，该酶通过松解染色质结构以增强转录。相反，组蛋白去乙酰化由组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 催化，可导致染色质凝聚和转录抑制。根据其大小、序列同源性和复合物形成，HDAC 分为三类 - I、II 和 III。在 II 类 HDAC 中，HDAC4 在调节对各种细胞功能至关重要的基因表达方面发挥着重要作用。HDAC4 具有独特的 N 端调节域，可与特定转录因子相互作用，以及 C 端含锌催化域。晶体结构分析表明，正确折叠的锌结合域对于形成阻遏复合物至关重要。HDAC4 的翻译后修饰会影响其亚细胞定位和与其他蛋白质的相互作用。 HDAC4 的一个关键功能是通过调节染色质凝聚和结构来介导转录抑制。翻译后修饰，特别是可逆磷酸化，对 HDAC4 的调节功能至关重要。HDAC4 与 14-3-3 蛋白家族相互作用，该家族特异性地与含磷酸丝氨酸的基序结合。HDAC4 可以被各种激酶磷酸化，包括钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶 (CaMK)、细胞外信号调节激酶 1 和 2 (ERK1/2)、蛋白激酶 A (PKA) 和糖原合酶激酶 3 (GSK3)。通过其在调节基因转录、细胞生长、存活和增殖中的作用，HDAC4 的失调或异常活性均可能导致癌症发生和发展。

特异性

HDAC4 Rabbit mAb识别内源性HDAC4总蛋白水平。

背景

组蛋白乙酰化和去乙酰化对于调节基因转录至关重要。组蛋白乙酰化由组蛋白乙酰转移酶 (HAT) 介导，该酶通过松解染色质结构以增强转录。相反，组蛋白去乙酰化由组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 催化，可导致染色质凝聚和转录抑制。根据其大小、序列同源性和复合物形成，HDAC 分为三类 - I、II 和 III。在 II 类 HDAC 中，HDAC4 在调节对各种细胞功能至关重要的基因表达方面发挥着重要作用。HDAC4 具有独特的 N 端调节域，可与特定转录因子相互作用，以及 C 端含锌催化域。晶体结构分析表明，正确折叠的锌结合域对于形成阻遏复合物至关重要。HDAC4 的翻译后修饰会影响其亚细胞定位和与其他蛋白质的相互作用。 HDAC4 的一个关键功能是通过调节染色质凝聚和结构来介导转录抑制。翻译后修饰，特别是可逆磷酸化，对 HDAC4 的调节功能至关重要。HDAC4 与 14-3-3 蛋白家族相互作用，该家族特异性地与含磷酸丝氨酸的基序结合。HDAC4 可以被各种激酶磷酸化，包括钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶 (CaMK)、细胞外信号调节激酶 1 和 2 (ERK1/2)、蛋白激酶 A (PKA) 和糖原合酶激酶 3 (GSK3)。通过其在调节基因转录、细胞生长、存活和增殖中的作用，HDAC4 的失调或异常活性均可能导致癌症发生和发展。

使用信息

抗体应用

WB, IP

稀释比例

WB	IP
1:1000	1:100

反应性

Human Mouse RatHuman, Mouse, Rat, Monkey

抗体类型

Rabbit

MW

140 kda

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	Western Blotting 样品制备 1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。 2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。 3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。 4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。 5. 离心5分钟(使用微量离心机)。 6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。 7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜 (湿转法参考条件: 200mA 150min)。膜封闭与抗体孵育 a. 封闭 1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。 2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。 3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 b. 抗体孵育 1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。 2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。 4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 5. 进行检测。显影检测 1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。 2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。 3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

Western Blotting

样品制备

1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。

2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。

3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。

4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。

5. 离心5分钟(使用微量离心机)。

6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。

7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜 (湿转法参考条件: 200mA 150min)。

膜封闭与抗体孵育

a. 封闭

1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。

2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。

3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

b. 抗体孵育

1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。

2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。

4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

5. 进行检测。

显影检测

1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。

2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。

3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

文献参考

[1] Wang Z, et al. Epigenomics. 2014 Feb;6(1):139-50.

Application Data

WB

Validated by Selleck

Lane 1: 293
Lane 2: Hela
Lane 3: H-4-II-E