Human CD3+ T Cell Negative Selection Kit

目录号：Q0023

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产品描述

产品介绍：

人 CD3+ T细胞阴性分选试剂盒可以实现轻松高效地从人外周血单个核细胞（PBMC）中分离高纯度 CD3+ T 细胞。

 

应用范围：

在该阴性选择过程中，非目的细胞被抗体复合物与磁珠标记。通过磁极将被磁珠标记的细胞与未被标记的目的 CD3+ T 细胞分离，从而实现人 CD3+ T 细胞分选的目的。得到的人 CD3+ T 细胞可进行流式细胞术、细胞培养或基于细胞的检测分析等下游应用。

 

产品优势：

操作简单、快捷，且无需分离柱；

纯度高达 95%；

分选得到的细胞不带标记。

 

组分：

人 CD3+ T 细胞分离抗体混合液，0.2 mL；

链霉亲和素磁珠，2 x 1 mL；

 

储存条件：

2 - 8°C储存。

实验步骤

实验前准备

分选 buffer 为含有 2 mM EDTA 和 2% 胎牛血清（FBS）的 PBS 或者含有 2mM EDTA 和 0.5% BSA 的 PBS，需预先通过 0.22 μm 滤膜过滤除菌。


 
实验步骤
1. 细胞准备: 准备新鲜的PBMC或液氮冻存的PBMC，调整细胞密度为1×108 cells/ml。
2. 将 100 μl 细胞悬液（1×107 个细胞）加入无菌流式管底部，再加入2 μl Biotin-Ab Mix，混匀后 4℃ 孵育 10 min。
注意：加入细胞悬液时将细胞加入流式管底部，避免沿流式管管壁加入。根据所使用磁力架特点也可使用离心管进行细胞分选。如果分选更多细胞，则按比例增加 Biotin-Ab Mix 用量。
3. 孵育完成后，在流式管中加入 20 μl 链霉亲和素磁珠（使用前涡旋振荡重悬磁珠），混匀后 4℃ 孵育 10 min。孵育过程中应轻轻敲打管壁 1~2 次，防止细胞和磁珠沉降。
注意：如果分选更多细胞，则按比例增加链霉亲和素磁珠用量。例如分选 5×107 细胞，则应在 500 μl 细胞悬液中加入 10 μl Biotin-Ab Mix 和 100 μl 链霉亲和素磁珠。如果分选少于 1×107 个细胞，则将细胞悬液体积补至 100 μl，使用 2 μl Biotin-Ab Mix 和 20 μl 链霉亲和素磁珠。
4. 孵育完成后，在流式管加入 2.5 ml 分选 buffer，以移液器上下混合吹打 5 次混匀（避免剧烈振荡或者上下颠倒混匀）。
5. 将含有细胞的分选流式管置于磁力架上（若没有合适的磁力架，可将流式管中液体转移到 15 mL 离心管中再置于磁力架上），静置5 min。
6. 将细胞悬液倒入无菌离心管中（倾倒过程中流式管不要脱离磁力架）或用吸管吸入离心管中（勿将液体吸尽，防止吸到磁珠），500 g，离心5 min。细胞悬液中即包含纯化的人 CD3+ T 细胞，离心后弃上清，收集细胞。
7. 根据实验需要洗涤细胞后，将细胞重悬于所需缓冲液或培养基中，即可用于后续分子生物学或细胞生物学实验。