IGF-I Receptor β Rabbit mAb

目录号：F0332

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生物描述

特异性

IGF-I Receptor β Rabbit mAb 可检测内源性 IGF-I Receptor β 总的蛋白水平。
背景

1 型胰岛素样生长因子受体 (Insulin-like growth factor receptor, IGF1R) 是胰岛素受体家族中的 II 类受体酪氨酸激酶 (RTK)，对细胞生长和分化至关重要。它可被 IGF1、IGF2 和胰岛素激活，其失调与多种人类疾病有关，包括生长迟缓和癌症。IGF-1 由培养的血管平滑肌细胞 (VSMC) 产生和释放。它可作为 VSMC 的强效有丝分裂原和抗凋亡因子，促进其迁移。胰岛素受体 (IR) 在结构和功能上与 IGF-I 受体相似，也表现出酪氨酸自磷酸化，这是对胰岛素的快速反应。IGF-1R 在 VSMC 上的表达受多种信号通路调控，这些信号通路受多种因素影响。例如，Ang II 诱导的 IGF-1R mRNA 和蛋白质上调涉及酪氨酸激酶活化、NF-κB 转录因子和活性氧 (ROS)，而不依赖于蛋白激酶 C。碱性成纤维细胞生长因子通过转录因子 STAT1、STAT3 和 Janus 激酶-2 激酶诱导 IGF-1R mRNA 上调。

使用信息

抗体应用 WB, IP, IF, FCM 稀释比例
WB IP IF FCM
1:1000 1:200 1:200 - 1:800 1:200 - 1:800
反应性 Human, Mouse, Rat, Monkey
抗体类型 Rabbit MW 95 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB

Western Blotting

 
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 120min)
 
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
 
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
 
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
IF

实验步骤：

 
标本制备
1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。
注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。
2. 室温固定细胞 15 分钟。
3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。
4. 继续进行免疫染色。
 
免疫染色
1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。
2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。
3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。
4. 4°C 孵育过夜。
5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。
7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。
9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。 如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: 293
    Lane 2: SK-UT-1