目录号：F1703

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生物描述

特异性

IKK alpha + IKK beta Rabbit mAb 可检测内源性总 IKK alpha/beta 的蛋白水平。
背景

NF-κB/Rel 转录因子通常以非活性状态存在于细胞质中，与抑制性 IκB 蛋白结合。NF-κB 的激活通常通过涉及蛋白酶体磷酸化诱导的 IκB 降解的途径触发。此过程中的关键步骤是激活 IκB 激酶 (IKK) 复合物，该复合物是一种由三个紧密关联的亚基组成的高分子量组装体。IKKα 和 IKKβ 充当激酶的催化亚基，而 IKKγ 充当调控成分。对于 IKK 激活，磷酸化发生在 IKKβ 激活环中的 Ser177 和 Ser181（对应于 IKKα 中的 Ser176 和 Ser180），导致激活激酶的构象变化。

使用信息

抗体应用 WB, IP 稀释比例
WB IP
1:1000 1:40
反应性 Human, Mouse, Rat
抗体类型 Rabbit MW 87 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB
Western Blotting
 
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 120min)
 
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
 
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
 
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: A431
    Lane 2: 293T
    Lane 3: RAW 264.7
    Lane 4: NIH/3T3