IP3 Receptor 1 Rabbit mAb

目录号：F0840

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生物描述

特异性

IP3 Receptor 1 Rabbit mAb识别内源性总 IP3R1 蛋白。由于抗原的高度保守性，该抗体还可检测 IP3R2 和 IP3R3。
背景

肌醇-1,4,5-三磷酸受体 (Inositol-1,4,5-trisphosphate receptors , InsP3Rs) 是一种大型、普遍存在的离子通道，可介导 Ca²⁺ 从细胞内储存库（如内质网 (ER) 和高尔基体）释放。脊椎动物有三种关系密切的 InsP3R 亚型 (IP3R1-3)，可形成同型和异型四聚体通道。每个 InsP3R 亚基由大约 2700 个氨基酸组成，包含10个结构域，负责通道稳定性、离子转运、配体结合和调控等功能。InsP3Rs 的激活需要IP3和 Ca²⁺ 结合，引起 Ca²⁺ 在细胞溶胶中，这对于肌肉收缩、分泌、增殖和细胞凋亡等过程至关重要。 InsP3R1 是研究最多的亚型，主要在小脑浦肯野细胞中表达。InsP3R1是 InsP3R 家族中表达最广泛、研究最深入的成员。除了由 InsP3 和 Ca²⁺ 激活外，InsP3R1 还受多种机制的调控，包括由 cAMP 依赖性蛋白激酶 (PKA) 和 cGMP 依赖性蛋白激酶 (PKG) 引起的磷酸化。这些激酶在小鼠 InsP3R1 中的两个特定丝氨酸残基 Ser1588 和 Ser1755 磷酸化该受体，进一步调控其活性。

使用信息

抗体应用 WB, IP 稀释比例
WB IP
1:1000 1:50
反应性 Human, Mouse, Rat
抗体类型 Rabbit MW 320 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB
Western Blotting
 
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。
 
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
 
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
 
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

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