Jagged1 Rabbit mAb

目录号：F0634

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生物描述

特异性

Jagged1 Rabbit mAb 可检测内源性总 Jagged1 的蛋白水平。该抗体不与 Jagged2 发生交叉反应。
背景

Jagged1 (JAG1) 是一种细胞表面配体，主要参与 Notch 信号通路，它通过与 NOTCH 受体相互作用激活基因转录，导致蛋白水解切割和 NOTCH 细胞内结构域的核易位。JAG1 突变与 Alagille 综合征等疾病以及法洛四联症有关。JAG1 位于 20p12.2 染色体上，横跨 36 kb，有 26 个外显子，编码含 1218 个氨基酸的蛋白质。蛋白质结构包括一个小的胞内结构域、一个跨膜结构域和一个较大的胞外区域，胞外区域具有信号肽、DSL 结构域、16 个 EGF 样重复序列和一个富含半胱氨酸的区域，这些区域对于其在细胞分化、增殖和细胞间通讯中的调控功能至关重要。

使用信息

抗体应用 WB, IP 稀释比例
WB IP
1:1000 1:50
反应性 Human Mouse RatHuman, Mouse
抗体类型 Rabbit MW 180 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB

Western Blotting

 
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。
 
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
 
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
 
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

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