Mouse CD45+ Cell lsolation Kit

目录号：Q0010

打印

产品描述

产品介绍：

小鼠CD45细胞分选试剂盒用于阳性分选或去除淋巴/非淋巴组织中的白细胞。CD45抗原在所有造血起源细胞（除红细胞和血小板外）表面均有表达。

应用范围：

● 阳性筛选或去除表达小鼠CD45抗原的细胞。

● 从脾脏、淋巴结、胸腺、骨髓、外周血、体液或非造血组织中分离或去除CD45+白细胞。

● 通过去除小鼠白细胞并结合抗Ter-119微珠，从嵌合小鼠骨髓中富集人类细胞。

组分：

CD45微珠，鼠源：CD45抗体和微珠通过共价偶联结合，分散在含有稳定剂和0.05%叠氮化钠的缓冲溶液中。

储存条件：

-20℃避光保存，避免反复冻融。

分选柱：

阳性分选：MS, LS, XS Columns

清除分选：LD, D Columns

背景信息：

小鼠CD45微珠用于从淋巴组织和非淋巴组织中对白细胞进行阳性筛选或去除。CD45抗原在除红细胞和血小板外的所有造血细胞中均有表达。

实验步骤

实验前准备

缓冲液配制： PBS缓冲液（pH 7.2）包括0.5%的BSA和2 mM EDTA，需预先通过0.22 μm滤膜过滤除菌。

实验步骤

1. 样本准备：
以小鼠脾脏为例:
a. 在70 μm细胞筛网上研磨脾脏，以预冷的 PBS 冲洗细胞筛网，收集细胞悬液于50 ml 离心管中，500 g，离心5 min。
b. 离心完成后，弃上清，加入5 ml ACK 红细胞裂解液，室温裂解5 min，再加入20 ml PBS，500 g，离心5 min。
注意：红细胞裂解步骤可根据所用裂解液不同调整用量及时间。少量红细胞残留不会影响后续分选及细胞纯度。
c. 离心完成后，弃上清，将脾细胞重悬于PBS，细胞悬液用70 μm细胞筛网过滤后，计数。计数完成后，继续以500 g，离心5 min。
d. 离心完成后，弃上清，将细胞重悬于分选 buffer 中，调整细胞密度为1×10⁸ cells/ml。
2. CD45微珠标记：每10⁷细胞中加入 10 µL CD45微珠，混匀后 4 ℃孵育15 min，每隔5 min轻弹混匀，避免细胞聚集。
注意：分选更多细胞时，按比例增加CD45微珠用量（如分选5×10⁷细胞，需在500 μL细胞悬液中加入50 μL CD45微珠）。
3. 洗涤细胞：孵育完成后，加入1 mL分选buffer（避免剧烈振荡或上下颠倒混匀）。300 g离心3 min，弃上清，加入1 mL分选buffer重悬细胞。
4. 磁珠分选：
将分选柱置于MACS分离器的磁场中，用缓冲液冲洗分选柱（MS柱： 500 μL；LS柱： 3 mL）。
将细胞悬液加入分选柱，收集未标记的流经细胞（可选），再用分选液清洗分选柱（MS柱： 2×1 mL；LS柱： 2×3 mL）。
5. 收集CD45阳性细胞：移出分选柱，加入适量缓冲液，用柱塞快速冲洗，收集磁性标记的CD45阳性细胞（MS柱： 2×1 mL；LS柱： 2×3 mL）。
注意：每次液体完全流尽后再进行下一步操作。
6.（可选）二次富集：若需更高纯度，可重复步骤4-5，在第二个分选柱上再次富集CD45阳性细胞。
实验全程保持低温（4℃），动作迅速以减少细胞损伤。