Myosin Light Chain 2 Rabbit mAb

目录号：F0485

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生物描述

特异性

Myosin Light Chain 2 Rabbit mAb识别内源性的总Myosin Light Chain 2蛋白。
背景

肌球蛋白由六条多肽链组成：两条相同的重链和两对轻链。肌球蛋白轻链 2 (MLC2)，也称为肌球蛋白调节轻链 (MRLC)、RLC 或 LC20，根据其分布有几种亚型。肌球蛋白轻链 2 (MYL2，也称为 MLC-2) 是一种 ∼19 kDa 肌节蛋白，属于 EF-手钙结合蛋白超家族，在哺乳动物横纹肌中以三种主要亚型存在，由三种不同的基因编码。这些亚型是：MLC-2f（快肌收缩骨骼亚型）、MLC-2v（心室和慢肌收缩骨骼亚型）和 MLC-2a（心房亚型），每种亚型在哺乳动物中都有独特的发育表达模式。在平滑肌中，MLC2 在 Thr18 和 Ser19 位点被肌球蛋白轻链激酶 (MLCK) 以 Ca2+/钙调蛋白依赖性方式磷酸化，这与肌球蛋白 ATPase 活性和平滑肌收缩有关。

使用信息

抗体应用 WB 稀释比例
WB
1:1000
反应性 Human, Mouse, Rat
抗体类型 Rabbit MW 18 kda
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB

Western Blotting

 
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜 (湿转法参考条件: 150mA 50min)。
 
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
 
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
 
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: C2C12
    Lane 2: A431
    Lane 3: T24
    Lane 4: 293T