NDUFS2 Rabbit mAb Datasheet

生物描述

特异性	NDUFS2 Rabbit mAb 用于检测内源性 NDUFS2 总的蛋白水平。
背景	NDUFS2（NADH 脱氢酶 [泛醌] 铁硫蛋白 2）是线粒体电子传递链 (ETC) 中复合物 I 的关键亚基，在细胞能量产生和氧化还原信号传导中起着核心作用。作为复合物 I 的 NADH 脱氢酶模块的一部分，NDUFS2 促进电子从 NADH 转移到泛醌，这是氧化磷酸化的关键步骤。这种电子转移与质子泵过线粒体膜相结合，产生驱动 ATP 合成的质子梯度。NDUFS2 对线粒体活性氧 (ROS) 的产生也至关重要，特别是过氧化氢 (H₂O₂)，它是一种参与调控各种细胞过程的信号分子。在肺血管系统中，NDUFS2 在应对低氧方面起着至关重要的作用。在常氧条件下，它有助于维持氧化还原状态，通过产生 H₂O₂ 支持肺血管舒张。然而，在低氧期间，由于复合物 I 抑制导致线粒体 H₂O₂ 生成减少，会引发低氧性肺血管收缩 (HPV)。NDUFS2 的这一功能在肺动脉平滑肌细胞 (PASMC) 中很重要，它在那里调控血管张力以响应氧气水平的变化。 NDUFS2 的突变或缺陷会导致线粒体复合物 I 缺乏，这与神经系统疾病和代谢功能障碍有关。

特异性

NDUFS2 Rabbit mAb 用于检测内源性 NDUFS2 总的蛋白水平。

背景

NDUFS2（NADH 脱氢酶 [泛醌] 铁硫蛋白 2）是线粒体电子传递链 (ETC) 中复合物 I 的关键亚基，在细胞能量产生和氧化还原信号传导中起着核心作用。作为复合物 I 的 NADH 脱氢酶模块的一部分，NDUFS2 促进电子从 NADH 转移到泛醌，这是氧化磷酸化的关键步骤。这种电子转移与质子泵过线粒体膜相结合，产生驱动 ATP 合成的质子梯度。NDUFS2 对线粒体活性氧 (ROS) 的产生也至关重要，特别是过氧化氢 (H₂O₂)，它是一种参与调控各种细胞过程的信号分子。在肺血管系统中，NDUFS2 在应对低氧方面起着至关重要的作用。在常氧条件下，它有助于维持氧化还原状态，通过产生 H₂O₂ 支持肺血管舒张。然而，在低氧期间，由于复合物 I 抑制导致线粒体 H₂O₂ 生成减少，会引发低氧性肺血管收缩 (HPV)。NDUFS2 的这一功能在肺动脉平滑肌细胞 (PASMC) 中很重要，它在那里调控血管张力以响应氧气水平的变化。 NDUFS2 的突变或缺陷会导致线粒体复合物 I 缺乏，这与神经系统疾病和代谢功能障碍有关。

使用信息

抗体应用

WB, IHC-P, IP, ICC/IF

稀释比例

WB	IP	IHC	IF
1:1000	1:40	1:500	0.4μg:ml

反应性

Mouse, Human, Rat

抗体类型

Rabbit

MW

48 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN₃

储存条件
(自收到货起)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含PMSF），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 53.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜）。 PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含PMSF），低温匀浆。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

53.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜）。 PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

文献参考

Application Data

WB

Validated by Selleck

Lane 1: HAP1
Lane 2: HAP1 (KO NDUFS2)
Lane 3: HeLa
Lane 4: Jurkat
Lane 5: Mouse brain
Lane 6: Rat brain