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生物描述
| 特异性 | NMDAR2A Rabbit mAb 可检测内源性总 NMDAR2A 的蛋白水平。 |
|---|---|
| 背景 | N-甲基-D-天冬氨酸受体亚基 2A (NMDAR2A) 是 NMDA 受体复合物的关键组成部分，在突触可塑性、学习和记忆中起着根本作用。NR2A 与 NR2B、NR2C 和 NR2D 共同属于 NR2 家族，通过影响通道特性和突触反应，促进受体的功能多样性。NR2A 的磷酸化（特别是在酪氨酸残基处）会调控 NMDA 受体活性，并且对于受体介导钙内流的作用至关重要，钙内流是突触信号传导中的关键事件。NR2A 信号失调会破坏突触可塑性并损害学习和记忆过程。这种功能障碍与阿尔茨海默病和精神分裂症等神经退行性疾病和精神疾病有关。 |
使用信息
| 抗体应用 | WB | 稀释比例 |
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|---|---|---|---|---|---|
| 反应性 | Human, Mouse, Rat | ||||
| 抗体类型 | Rabbit | MW | 165 kDa | ||
| 储存液配方 | PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 | 储存条件 (自收到货起) |
–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years | ||
| WB |
Western Blotting 样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。
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文献参考
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