目录号：F1367

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生物描述

特异性

p38δ MAPK Rabbit mAb检测内源性p38δ MAP激酶总蛋白水平。
背景

p38 MAP 激酶 (MAPK) 是酵母 HOG 激酶的哺乳动物对应物，参与调节细胞对细胞因子和压力反应的信号级联。p38 MAPK 有四种已鉴定的异构体：p38α、p38β、p38γ（也称为 Erk6 或 SAPK3）和 p38δ（也称为 SAPK4）。与 SAPK/JNK 通路类似，p38 MAPK 被各种细胞应激激活，包括渗透性休克、炎性细胞因子、脂多糖 (LPS)、紫外线和生长因子。一旦被激活，p38 MAPK 就会磷酸化并激活 MAPKAP 激酶 2，并磷酸化转录因子，如 ATF-2、Max 和 MEF2。

使用信息

抗体应用 WB, IP 稀释比例
WB IP
1:1000 1:50
反应性 Human, Rat
抗体类型 Rabbit MW 43 kda
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB

Western Blotting

 
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜 (湿转法参考条件: 150mA 90min)。
 
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
 
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
 
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: 293
    Lane 2: NBT-II
    Lane 3: PC12