Pannexin-1 Rabbit mAb Datasheet

生物描述

特异性	Pannexin-1 Rabbit mAb识别内源性Pannexin-1总蛋白。该抗体检测由半胱天冬酶裂解产生的氨基末端pannexin-1片段。
背景	Pannexin 家族蛋白形成大孔跨膜通道，使 ATP 释放到细胞外环境，并参与各种生物过程，包括炎症、ATP 信号传导、突触可塑性和神经毒性。该家族包括三个成员：Panx1（426 个氨基酸，47.6 kDa）、Panx2（664 个氨基酸，73.3 kDa）和 Panx3（392 个氨基酸，44.7 kDa），属于脊椎动物的非间隙连接超家族。Panx1 形成阴离子选择性通道，允许高达 1 kDa 的离子和分子通过，包括 ATP、细胞内 Ca2+ 和葡萄糖。Panx1 介导的 ATP 释放对于生理和病理生理状况以及嘌呤能信号传导至关重要。 Panx1 由膜去极化和机械拉伸激活，与 P2X7 等嘌呤受体相互作用，并通过释放 ATP 和 UTP 作为“find-me”信号来清除凋亡细胞，从而调节免疫功能。Panx1 主要在质膜中表达，与各种病理有关，可能作为肿瘤抑制因子或影响缺血性细胞死亡、动脉粥样硬化、细胞凋亡、艾滋病和癫痫发作。

特异性

Pannexin-1 Rabbit mAb识别内源性Pannexin-1总蛋白。该抗体检测由半胱天冬酶裂解产生的氨基末端pannexin-1片段。

背景

Pannexin 家族蛋白形成大孔跨膜通道，使 ATP 释放到细胞外环境，并参与各种生物过程，包括炎症、ATP 信号传导、突触可塑性和神经毒性。该家族包括三个成员：Panx1（426 个氨基酸，47.6 kDa）、Panx2（664 个氨基酸，73.3 kDa）和 Panx3（392 个氨基酸，44.7 kDa），属于脊椎动物的非间隙连接超家族。Panx1 形成阴离子选择性通道，允许高达 1 kDa 的离子和分子通过，包括 ATP、细胞内 Ca2+ 和葡萄糖。Panx1 介导的 ATP 释放对于生理和病理生理状况以及嘌呤能信号传导至关重要。 Panx1 由膜去极化和机械拉伸激活，与 P2X7 等嘌呤受体相互作用，并通过释放 ATP 和 UTP 作为“find-me”信号来清除凋亡细胞，从而调节免疫功能。Panx1 主要在质膜中表达，与各种病理有关，可能作为肿瘤抑制因子或影响缺血性细胞死亡、动脉粥样硬化、细胞凋亡、艾滋病和癫痫发作。

使用信息

抗体应用

WB, IP

稀释比例

WB	IP
1:1000	1:100

反应性

Human, Mouse, Rat

抗体类型

Rabbit

MW

45-55, 19 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN₃

储存条件
(自收到货起)

–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含PMSF），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜）。 PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含PMSF），低温匀浆。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含PMSF），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜）。 PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

文献参考

[1] Bhat EA, et al. Mol Cell Biochem. 2021 Mar;476(3):1529-1540.

Application Data

WB

Validated by Selleck

Lane 1: PANC-1
Lane 2: K-562
Lane 3: U87
Lane 4: 786-0
Lane 5: C2C12
Lane 6: A20
Lane 7: L-929
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