Phospho-4E-BP1 (Ser65) Rabbit mAb

目录号：F0339

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生物描述

特异性

仅当 4E-BP1 Ser65 位点磷酸化时Phospho-4E-BP1 (Ser65) Rabbit mAb 才可检测内源性 Phospho-4E-BP1 (Ser65) 总的蛋白水平。
背景

磷酸化-4E-BP1 (Ser65) 是帽依赖性翻译起始的重要调控因子，主要受 mTOR 信号通路调控。这种磷酸化促进了 4E-BP1 从 eIF4E 中释放，从而形成了蛋白质合成所需的 eIF4F 复合物。作为一种重要的生物标志物，其磷酸化状态反映了 mTOR 活性，并提供了对生长因子和营养水平反应的翻译控制机制的见解。4E-BP1 和 eIF4E 之间的相互作用至关重要；4E-BP1 的过度磷酸化减轻了其对翻译的抑制作用。4E-BP1 的调控涉及多种信号通路，包括 PI3K/Akt信号通路，其中特定残基的磷酸化是其进一步修饰的基础。

使用信息

抗体应用 WB, IP 稀释比例
WB IP
1:1000 1:100
反应性 Human, Monkey
抗体类型 Rabbit MW 15-20 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB

Western Blotting

 
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 50min)
 
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
 
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
 
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: 293 (λ phosphatase treated)
    Lane 2: 293 (20% FBS treated)