Phospho-Axl (Tyr702) Rabbit mAb Datasheet

生物描述

特异性	Phospho-Axl (Tyr702) Rabbit mAb仅当酪氨酸702位点 (Tyr702) 磷酸化时才可识别内源性 Axl 蛋白。
背景	AXL 是 TAM 受体家族的成员，该家族包括 TYRO3、AXL 和 MER。其高亲和力配体是生长停滞特异性蛋白 6 (GAS6)，GAS6/AXL 信号通路在促进癌细胞存活、增殖、迁移、侵袭、上皮-间充质转化 (EMT)、血管生成、耐药性、免疫调控和干细胞维持方面发挥着重要作用。AXL 由细胞外、跨膜和细胞内结构域组成。细胞外区域具有两个免疫球蛋白 (Ig) 样重复序列和两个纤连蛋白 III 型 (Fro III) 样重复序列，类似于神经细胞粘附分子 (NCAM)。Ig 基序介导 AXL 与 GAS6 的相互作用，由 Fro III 重复序列调控。细胞内结构域对于自身磷酸化和激酶活性至关重要。 GAS6 结合可激活下游信号通路，包括磷脂酰肌醇 3-激酶 (PI3K)、Akt、S6K 和 NF-κB。AXL 有六个已确定的磷酸化位点：Tyr698、Tyr702、Tyr703、Tyr779、Tyr821 和 Tyr866，其中 Tyr702 磷酸化可在某些癌细胞系中观察到。

特异性

Phospho-Axl (Tyr702) Rabbit mAb仅当酪氨酸702位点 (Tyr702) 磷酸化时才可识别内源性 Axl 蛋白。

背景

AXL 是 TAM 受体家族的成员，该家族包括 TYRO3、AXL 和 MER。其高亲和力配体是生长停滞特异性蛋白 6 (GAS6)，GAS6/AXL 信号通路在促进癌细胞存活、增殖、迁移、侵袭、上皮-间充质转化 (EMT)、血管生成、耐药性、免疫调控和干细胞维持方面发挥着重要作用。AXL 由细胞外、跨膜和细胞内结构域组成。细胞外区域具有两个免疫球蛋白 (Ig) 样重复序列和两个纤连蛋白 III 型 (Fro III) 样重复序列，类似于神经细胞粘附分子 (NCAM)。Ig 基序介导 AXL 与 GAS6 的相互作用，由 Fro III 重复序列调控。细胞内结构域对于自身磷酸化和激酶活性至关重要。 GAS6 结合可激活下游信号通路，包括磷脂酰肌醇 3-激酶 (PI3K)、Akt、S6K 和 NF-κB。AXL 有六个已确定的磷酸化位点：Tyr698、Tyr702、Tyr703、Tyr779、Tyr821 和 Tyr866，其中 Tyr702 磷酸化可在某些癌细胞系中观察到。

使用信息

抗体应用

WB

稀释比例

WB

1:1000

反应性

Human

抗体类型

Rabbit

MW

138 kda

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	Western Blotting 样品制备 1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。 2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。 3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。 4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。 5. 离心5分钟(使用微量离心机)。 6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。 7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 150min) 膜封闭与抗体孵育 a. 封闭 1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。 2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。 3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 b. 抗体孵育 1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。 2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。 4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 5. 进行检测。显影检测 1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。 2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。 3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

Western Blotting

样品制备

1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。

2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。

3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。

4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。

5. 离心5分钟(使用微量离心机)。

6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。

7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 150min)

膜封闭与抗体孵育

a. 封闭

1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。

2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。

3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

b. 抗体孵育

1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。

2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。

4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

5. 进行检测。

显影检测

1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。

2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。

3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

文献参考

[1] Zhu C, et al. Mol Cancer. 2019 Nov 4;18(1):153.

Application Data

WB

Validated by Selleck

Lane 1: NCI-H1299
Lane 2: NCI-H1299(Gas6-treated, 100 ng/ml, 10 minutes)

IHC

Validated by Selleck

Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human Lung adenocarcinoma tissue with F0592 at 1/100 dilution.