Phospho-Cyclin D1 (Thr286) Rabbit mAb

目录号：F0593

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生物描述

特异性

Phospho-Cyclin D1 (Thr286) Rabbit mAb仅当苏氨酸286位点 (Thr286) 磷酸化时才可识别内源性细胞周期蛋白 D1 (Cyclin D1)。
背景

细胞周期蛋白 D1 (Cyclin D1 ) 主要因其在调控细胞周期进程中的核心作用而受到重视。它通过充当细胞周期蛋白依赖性激酶 4 (CDK4) 和 激酶6 (CDK6) 的变构调控剂来控制细胞从 G1 期到 S 期的过渡。激活的 Cyclin D1/CDK4 复合物易位到细胞核中， 与Cyclin E/CDK2 共同磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白 (RB)，从而减轻 RB 对 E2F 转录因子的抑制作用。这一过程使得 E2F 能够激活对细胞增殖至关重要的基因的转录。在正常细胞中，Cyclin D1 的表达受到严格控制；然而，在癌症中，其活性经常通过各种机制上调。Cyclin D1 转录失调、积累、泛素化及其相关 CDK 的过度激活会导致细胞生长失控。因此，Cyclin D1 被认为是多种癌症的致癌驱动因素，包括乳腺癌、肺癌和黑色素瘤等。在糖原合酶激酶 3β (glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β)的作用下或经 Ras/Raf/MEK/MAPK 通路在 Thr286 位点对 Cyclin D1 的磷酸化会增强其泛素化和随后的蛋白酶体降解过程。

使用信息

抗体应用 WB, IP, IF, FCM 稀释比例
WB IP IF FCM
1:1000 1:50 1:2000 1:1600
反应性 Human, Monkey
抗体类型 Rabbit MW 36 Kda
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IF
实验步骤：
 
标本制备
1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。
注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。
2. 室温固定细胞 15 分钟。
3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。
4. 继续进行免疫染色。
 
免疫染色
1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。
2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。
3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。
4. 4°C 孵育过夜。
5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。
7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。
9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。 如需长期保存，请将载玻片平放在 4°C 避光保存。
 

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: HT-1080
    Lane 2: HT-1080 (MG132, 10 μM, 4 hours)