Phospho-eNOS (Ser1177) Rabbit mAb

目录号：F0354

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生物描述

特异性

仅当 Ser1177 位点发生磷酸化时，Phospho-eNOS (Ser1177) Rabbit mAb才 可检测内源性总 Phospho-eNOS 的蛋白水平。
背景

内皮型一氧化氮合酶 (eNOS) 对健康心血管系统的调控和维持至关重要。eNOS 基因的遗传多态性、eNOS 二聚化的破坏及其复杂的信号传导调控突显了 eNOS 的重要性。eNOS 由 NOS3 基因编码，位于人类 7 号染色体的 7q35-7q36 区域。该酶能够产生一氧化氮 (NO)，这是一种对心血管健康至关重要的关键神经递质和神经调控因子，因此在心血管系统中起着保护作用。 eNOS 基因的多态性与心血管疾病 (CVD) 风险增加有关。eNOS 催化 NO 的产生，NO 是血压、血管重塑和血管生成的关键调控因子。其活性由多个位点的磷酸化控制，其中研究最广泛的是 Ser1177（可激活 eNOS）和 Thr495（可抑制 eNOS）。Ser1177 处的 eNOS 激活由各种蛋白激酶介导，包括 Akt/PKB、PKA 和 AMPK，以响应不同的刺激。

使用信息

抗体应用 WB, IP 稀释比例
WB IP
1:1000 1:25
反应性 Human Mouse RatHuman, Bovine, Pig
抗体类型 Rabbit MW 140 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB

Western Blotting

 
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 150min)
 
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
 
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
 
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: BAEC (phosphatase treated)
    Lane 2: BAEC (VEGF treated)