Phospho-IGF-I Receptor β (Tyr980) Rabbit mAb

目录号：F1451

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生物描述

特异性

Phospho-IGF-I Receptor β (Tyr980) Rabbit mAb 仅当酪氨酸980位点 (Tyr980) 磷酸化时才识别内源性 IGF-IR β 蛋白。该抗体可能与活化的胰岛素受体和 FLT3 发生交叉反应。
背景

1 型胰岛素样生长因子受体 (IGF-1R) 是一种与胰岛素受体 (IR) 相关的受体酪氨酸激酶 (RTK)，以二聚体复合物的形式存在，其中有两个细胞外 α 亚基和两个 β 亚基通过二硫键连接。成熟的 IGF-1R 由 α 亚基和 β 亚基组成，它们通过二硫键以 β-α-α-β 构型连接。α 亚基完全位于细胞外，而 β 亚基跨越膜并具有内在酪氨酸激酶活性。IGF-1R 主要调控细胞增殖、存活、分化和运动，主要参与葡萄糖代谢。IGF-1R 的激活涉及配体诱导的受体酪氨酸激酶 (TK) 结构域内特定酪氨酸残基的磷酸化。当 IGF-1 或 IGF-2 与受体结合时，它会诱导 IGF-1R 发生构象转变，从而导致 TK 结构域活化环中酪氨酸残基的自磷酸化，特别是 Tyr1131、Tyr1135 和 Tyr1136。这种磷酸化会破坏活化环的自抑制结构，从而增强激酶活性。Tyr980 的磷酸化对激酶活化至关重要，可形成下游接头蛋白的对接位点。这些磷酸化事件促进了关键信号通路的激活，包括 PI3K 和 MAPK，这些通路对于调控细胞增殖、存活和分化等过程至关重要。

使用信息

抗体应用 WB 稀释比例
WB
1:1000
反应性 Human, Mouse, Rat
抗体类型 Rabbit MW 95 Kda
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB
Western Blotting
 
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 120min)
 
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
 
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
 
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: MCF-7
    Lane 2: MCF-7(IGF-I-treated)

IHC

Validated by Selleck

  • Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human Colorectal cancer tissue with F1451 at 1/100 dilution.