Phospho-IGF-I Receptor (Tyr1135/1136)/Insulin Receptor (Tyr1150/1151) Rabbit mAb

目录号：F0247

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生物描述

特异性

仅当 Tyr1135/1136 或 Tyr1150/1151 位点发生磷酸化时，Phospho-IGF-I Receptor (Tyr1135/1136)/Insulin Receptor (Tyr1150/1151) Rabbit mAb 才可检测内源性总 Phospho-IGF-I Receptor (Tyr1135/1136)/Insulin Receptor (Tyr1150/1151) 的蛋白水平。该抗体不与其他相关的酪氨酸磷酸化酪氨酸激酶发生交叉反应。
背景

磷酸化 IGF-I 受体 β (Tyr1135/1136) 和胰岛素受体 β (Tyr1150/1151) 分别是 IGF-1 受体 (IGF-1R) 和胰岛素受体 (IR) 的 β 亚基上特定酪氨酸残基的磷酸化形式。这些受体是异四聚体跨膜酪氨酸激酶，由两个 α 亚基和两个 β 亚基组成。当受体与胰岛素或 IGF-1 等配体结合时，受体会在关键酪氨酸残基处发生自磷酸化，包括 IGF-1R 上的 Tyr1135/1136 和 IR 上的 Tyr1150/1151，它们是激酶域内关键酪氨酸簇的一部分。这种自磷酸化对于受体激活至关重要，使其能够磷酸化下游信号分子，从而启动与细胞生长、代谢和存活相关的各种细胞内信号级联。这些酪氨酸的磷酸化对于受体激酶活性的完全激活以及随后的细胞对胰岛素和 IGF-1 的反应是必不可少的。

使用信息

抗体应用 WB 稀释比例
WB
1:1000
反应性 Human Mouse RatHuman, Mouse, Rat
抗体类型 Rabbit MW 95 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB

Western Blotting

 
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 120min)
 
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
 
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
 
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: Hela
    Lane 2: Hela (IGF treated)
    Lane 3: H-4-II-E
    Lane 4: H-4-II-E (insulin treated)