Phospho-NF-B p105 (Ser932) Rabbit mAb

目录号：F0400

打印

生物描述

特异性

仅当 Ser932 位点发生磷酸化时，Phospho-NF-B p105 (Ser932) Rabbit mAb 可检测内源性总 Phospho-NF-B p105 (Ser932) 的蛋白水平。
背景

NF-κB（核因子 κB）转录因子在调控免疫和炎症反应中起着重要作用。NF-κB（核因子 κB）/Rel 转录因子家族的两个成员 NF-κB1 和 NF-κB2 分别作为前体蛋白 NF-κB1 p105 和 NF-κB2 p100 产生。在 TNFα 刺激或 LPS 激活 TLR4 后，NF-κB p105 在 Ser932 位点被 IKK 复合物磷酸化。PEST 区域的这种磷酸化会募集 SCFβTrCP E3 连接酶，导致 p105 泛素化和蛋白酶体降解。p105 降解会释放 TPL-2，从而激活 MEK/ERK 信号通路。因此，NF-κB p105 在 Ser932 处的磷酸化可调控 NF-κB 活化和 MAP 激酶信号传导，通过控制淋巴细胞和巨噬细胞的功能来协调免疫和炎症反应。

使用信息

抗体应用 WB, IP 稀释比例
WB IP
1:1000 1:100
反应性 Human Mouse RatHuman, Mouse, Rat, Monkey
抗体类型 Rabbit MW 120 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB

Western Blotting

 
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 150min)
 
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
 
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
 
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: HeLa
    Lane 2: HeLa (TNF-α,20 ng/ml,5 min; Calyculin A,50 nM,5 min)
    Lane 3: NIH/3T3
    Lane 4: NIH/3T3 (TNF-α,20 ng/ml,5 min; Calyculin A,50 nM,5 min)