Phospho-SHP-1 (Tyr564) Rabbit mAb Datasheet

生物描述

特异性	Phospho-SHP-1 (Tyr564) Rabbit mAb仅当 Tyr564 位点磷酸化时才可检测内源性 SHP-1 总的蛋白水平。
背景	SHP-1 是一种含有 SH2 结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶，主要在造血细胞中表达，它是淋巴细胞中细胞内磷酸酪氨酸水平的重要调控因子。该酶由两个 SH2 结构域、一个催化酪氨酸磷酸酶结构域和一个位于羧基末端的调控结构域组成。 SHP-1 通过其 SH2 结构域与 CD22、CD72、FcgRIIB、p70-NKB1 和 KIR 等抑制受体的免疫受体酪氨酸抑制基序 (ITIM) 相互作用。结合后，它使下游蛋白质去磷酸化，导致激活信号传导终止或激活替代途径，例如淋巴细胞凋亡。淋巴细胞中 SHP-1 的功能障碍与淋巴瘤、白血病和其他相关疾病的发展有关。在上皮细胞中，SHP-1 过表达会导致 Ros 受体酪氨酸激酶去磷酸化，从而导致 Ros 依赖性细胞增殖和转化减少。SHP-1 也是 Src 家族激酶的靶标，Tyr564 的磷酸化被认为是最大化其磷酸酶活性所必需的。

特异性

Phospho-SHP-1 (Tyr564) Rabbit mAb仅当 Tyr564 位点磷酸化时才可检测内源性 SHP-1 总的蛋白水平。

背景

SHP-1 是一种含有 SH2 结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶，主要在造血细胞中表达，它是淋巴细胞中细胞内磷酸酪氨酸水平的重要调控因子。该酶由两个 SH2 结构域、一个催化酪氨酸磷酸酶结构域和一个位于羧基末端的调控结构域组成。 SHP-1 通过其 SH2 结构域与 CD22、CD72、FcgRIIB、p70-NKB1 和 KIR 等抑制受体的免疫受体酪氨酸抑制基序 (ITIM) 相互作用。结合后，它使下游蛋白质去磷酸化，导致激活信号传导终止或激活替代途径，例如淋巴细胞凋亡。淋巴细胞中 SHP-1 的功能障碍与淋巴瘤、白血病和其他相关疾病的发展有关。在上皮细胞中，SHP-1 过表达会导致 Ros 受体酪氨酸激酶去磷酸化，从而导致 Ros 依赖性细胞增殖和转化减少。SHP-1 也是 Src 家族激酶的靶标，Tyr564 的磷酸化被认为是最大化其磷酸酶活性所必需的。

使用信息

抗体应用

WB

稀释比例

WB

1:1000

反应性

Human, Mouse

抗体类型

Rabbit

MW

68 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	Western Blotting 样品制备 1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。 2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。 3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。 4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。 5. 离心5分钟(使用微量离心机)。 6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。 7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 120min) 膜封闭与抗体孵育 a. 封闭 1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。 2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。 3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 b. 抗体孵育 1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。 2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。 4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 5. 进行检测。显影检测 1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。 2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。 3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

Western Blotting

样品制备

1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。

2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。

3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。

4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。

5. 离心5分钟(使用微量离心机)。

6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。

7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 120min)

膜封闭与抗体孵育

a. 封闭

1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。

2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。

3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

b. 抗体孵育

1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。

2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。

4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

5. 进行检测。

显影检测

1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。

2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。

3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

文献参考

[1] Wu C, et al. Gene. 2003 Mar 13:306:1-12.

Application Data

WB

Validated by Selleck

Lane 1: Jurkat
Lane 2: Jurkat (λ phosphatase treated)