Phospho-Src Family (Tyr416) Rabbit mAb Datasheet

生物描述

特异性	仅当 Tyr416 位点发生磷酸化时，Phospho-Src Family (Tyr416) Rabbit mAb 才可检测内源性总 Phospho-Src 的蛋白水平。
背景	Src 蛋白酪氨酸激酶家族包括 Src、Lyn、Fyn、Yes、Lck、Blk 和 Hck，在调控真核细胞的生长和分化方面起着至关重要的作用。Src 由多种细胞外信号激活，包括整合素、G 蛋白偶联受体、类固醇受体和受体酪氨酸激酶 (RTK)，例如血小板衍生的生长因子受体 (PDGFR)、表皮生长因子受体 (EGFR) 家族、成纤维细胞生长因子受体 (FGFR)、胰岛素样生长因子-1 受体 (IGF-1R)、c-Met、集落刺激因子-1 受体 (CSF-1R) 和干细胞因子受体 (SCFR) 等。 Src 活性受两个关键酪氨酸残基的磷酸化调控，这两个残基具有相反的作用：激酶结构域活化环中 Tyr416 的磷酸化可增强 Src 活性，而 C 末端 Src 激酶 (Csk) 对 C 末端尾部 Tyr527 的磷酸化可抑制 Src 活性。

特异性

仅当 Tyr416 位点发生磷酸化时，Phospho-Src Family (Tyr416) Rabbit mAb 才可检测内源性总 Phospho-Src 的蛋白水平。

背景

Src 蛋白酪氨酸激酶家族包括 Src、Lyn、Fyn、Yes、Lck、Blk 和 Hck，在调控真核细胞的生长和分化方面起着至关重要的作用。Src 由多种细胞外信号激活，包括整合素、G 蛋白偶联受体、类固醇受体和受体酪氨酸激酶 (RTK)，例如血小板衍生的生长因子受体 (PDGFR)、表皮生长因子受体 (EGFR) 家族、成纤维细胞生长因子受体 (FGFR)、胰岛素样生长因子-1 受体 (IGF-1R)、c-Met、集落刺激因子-1 受体 (CSF-1R) 和干细胞因子受体 (SCFR) 等。 Src 活性受两个关键酪氨酸残基的磷酸化调控，这两个残基具有相反的作用：激酶结构域活化环中 Tyr416 的磷酸化可增强 Src 活性，而 C 末端 Src 激酶 (Csk) 对 C 末端尾部 Tyr527 的磷酸化可抑制 Src 活性。

使用信息

抗体应用

WB, IP

稀释比例

WB	IP
1:1000	1:100

反应性

Human Mouse RatHuman, Mouse, Rat, Monkey

抗体类型

Rabbit

MW

60 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	Western Blotting 样品制备 1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。 2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。 3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。 4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。 5. 离心5分钟(使用微量离心机)。 6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。 7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 120min) 膜封闭与抗体孵育 a. 封闭 1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。 2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。 3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 b. 抗体孵育 1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。 2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。 4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。 5. 进行检测。显影检测 1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。 2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。 3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

Western Blotting

样品制备

1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。

2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。

3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。

4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。

5. 离心5分钟(使用微量离心机)。

6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。

7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 120min)

膜封闭与抗体孵育

a. 封闭

1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。

2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。

3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

b. 抗体孵育

1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。

2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。

4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。

5. 进行检测。

显影检测

1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。

2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。

3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

文献参考

Application Data

WB

Validated by Selleck

Lane 1: NIH/3T3 (hPDGF-BB,100 ng/ml,15min)
Lane 2: NIH/3T3 (serum-starved)