PI3 Kinase Class II α Rabbit mAb

目录号：F1515

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生物描述

特异性

PI3 Kinase Class II α Rabbit mAb可检测内源性 PI3 Kinase Class II α 总的蛋白水平。
背景

II 类磷脂酰肌醇 3-激酶 (PI3K) 具有独特的 C 端 C2 结构域，该结构域是 PI3K 家族中 II 类亚型所特有的。该 C2 结构域负责介导与蛋白质和磷脂的相互作用。PI3K II 类 α 存在于各种细胞位置，包括反高尔基网络、内吞区、网格蛋白包被囊泡和核斑点。它在从磷脂酰肌醇和磷脂酰肌醇 4-磷酸生成磷脂酰肌醇 3-磷酸 (PIP3) 和磷脂酰肌醇 3,4-双磷酸 (PI(3,4)P2) 中发挥作用。此外，PI3K II 类 α 促进葡萄糖转运蛋白 GLUT4 在胰岛素刺激下易位到质膜。

使用信息

抗体应用 WB, IP 稀释比例
WB IP
1:1000 1:50
反应性 Human Mouse RatHuman, Mouse, Rat, Monkey
抗体类型 Rabbit MW 180 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB
Western Blotting
 
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。
 
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
 
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
 
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

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