PI3 Kinase p101 Rabbit mAb

目录号：F1398

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生物描述

特异性

PI3 Kinase p101 Rabbit mAb识别内源性的PI3 Kinase p101总蛋白。
背景

磷脂酰肌醇 3-激酶 (PI3K) 通过磷酸化磷脂酰肌醇 (PI)、磷脂酰肌醇-4-磷酸 (PIP) 和磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸 (PIP2) 来催化磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸的产生。这种由生长因子和激素引发的磷酸化事件可调节细胞生长、细胞周期进入、细胞迁移和细胞存活。 PI3K 由催化亚基 (p110) 和调节亚基组成。催化亚基的不同亚型包括 p110α、p110β、p110γ 和 p110δ。与 p110α、p110β 和 p110δ 相关的调节亚基是 p85α 和 p85β。p101 调节亚基与异三聚体 G 蛋白释放的 Gβγ 结合，并将 p110γ 催化亚基募集到质膜，这对于 GPCR 诱导的 PI3Kγ 活性至关重要。

使用信息

抗体应用 WB 稀释比例
WB
1:1000
反应性 Human Mouse RatHuman, Mouse
抗体类型 Rabbit MW 101 kda
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB

Western Blotting

 
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜 (湿转法参考条件: 200mA 120min)。
 
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
 
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
 
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: RAW264.7
    Lane 2: Jurkat