PI3 Kinase p55 Rabbit mAb

目录号：F0850

打印

生物描述

特异性

PI3 Kinase p55 Rabbit mAb 可检测内源性总 PI3 Kinase p55 (PIK3R3) 的蛋白水平。该抗体不与 PI3K p85α (PIK3R1) 或 PI3K p85β (PIK3R2) 蛋白发生交叉反应。
背景

PI3K p55 是 IA 类磷酸肌醇 3-激酶 (PI3K) 的调控亚基，源自 PIK3R1 基因的替代剪接，该基因也产生 p85 亚基。从结构上讲，p55 是一种 55 kDa 蛋白质，包含一个独特的 30 个残基的 N 端、一个富含脯氨酸的基序和两个与 p85 中相似的 Src 同源性 2 (SH2) 结构域。这些结构域位于与 p110 催化亚基的 N 端特异性相互作用的区域的两侧。p55 在各种组织中表达，包括大脑、睾丸、脂肪细胞、心脏和肾脏。它在调控生长、增殖、存活、细胞迁移和分化的细胞信号通路中起着关键作用。在致癌环境中，p55 通过 PI3K-AKT 通路参与 ALK 诱导的细胞迁移和增殖，并调控 DNA 合成、细胞周期进展和肿瘤血管生成等过程。

使用信息

抗体应用 WB, IP 稀释比例
WB IP
1:1000 1:50
反应性 Human Mouse RatHuman, Mouse
抗体类型 Rabbit MW 55 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB

Western Blotting

 
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 150mA 50min)
 
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
 
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
 
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Application Data