PITSLRE/CDK11 Rabbit mAb

目录号：F2651

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生物描述

特异性

PITSLRE/CDK11 Rabbit mAb 可检测内源性 PITSLRE/CDK11 总的蛋白水平。
背景

细胞周期蛋白依赖性激酶 PITSLRE，也称为 CDK11，是 p34cdc2 家族的成员，由两个基因 CDK11A 和 CDK11B 产生。 CDK11 最初被确定为细胞分裂的调控因子，此后已被证明在 RNA 剪接、细胞凋亡、姐妹染色单体凝聚和胞质分裂中发挥多种作用。最近的研究表明，CDK11 是自噬的关键调控因子，在营养丰富的条件下起着抑制作用。然而，CDK11 的长期缺失会导致未成熟的自噬中间体的积累并抑制自噬通量，这表明其在包括果蝇和人类在内的不同物种的自噬中的作用是保守的。

使用信息

抗体应用 WB, IP 稀释比例
WB IP
1:1000 1:50
反应性 Human, Mouse, Monkey
抗体类型 Rabbit MW 110 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 –20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
WB
Western Blotting
 
样品制备
1. 吸去培养基,用1X PBS清洗细胞。
2. 加入1X SDS上样缓冲液裂解细胞,将提取物转移至微量离心管中。置于冰上。
3. 超声10–15秒,完成细胞裂解和DNA剪切。
4. 将20 µl样品在95–100°C加热5分钟,然后置于冰上冷却。
5. 离心5分钟(使用微量离心机)。
6. 将适量样品上样至SDS-PAGE凝胶(上样量取决于提取蛋白浓度)。注意:同时请上样预染分子量标准,以确定分子量并验证电转效果。
7. 电转至硝酸纤维素膜/PVDF膜。(湿转法参考条件: 200mA 150min)
 
膜封闭与抗体孵育
a. 封闭
1. (可选)转膜完成后,用TBS室温洗膜5分钟。
2. 将膜在封闭液中室温孵育1小时。
3. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
 
b. 抗体孵育
1. 将膜与一抗(按推荐的稀释度和稀释液配制)置于一抗稀释缓冲液中,4°C温和摇床过夜孵育。
2. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
3. 将膜与适当的二抗(稀释于封闭液中)在室温下温和摇床孵育1小时。
4. 用TBST洗涤3次,每次5分钟。
5. 进行检测。
 
显影检测
1. 抗体孵育结束后,用TBST洗膜3次,每次5分钟。
2. 配制ECL发光试剂(或根据二抗类型选择其他显色剂/底物)。混匀。
3. 将底物与膜孵育1分钟,去除多余溶液(膜保持湿润),置于显影仪中进行曝光。

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: Hela
    Lane 2: 293